O157:H7 Ivy蛋白表位多肽及免疫原性分析

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• 论文作者：潘艳 ; 林敏玲 ; 杨威 ; 陈泽祥 ; 谢永平 ; 彭昊 ; 李军 ; 胡庭俊
• 年：2016
• 作者机构：广西畜禽疫苗新技术重点实验室;广西兽医研究所;广西大学动物科学技术学院;
• 论文关键词：EHEC O157 ; H7 ; Ivy ; 多肽 ; 免疫原性
• 会议召开时间：2016-07-20
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：S852.61
• 学会代码：SYGW
• 会议名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会
• 会议地点：中国内蒙古通辽
• 主办单位：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会
• 页数：7
• 文件大小：661k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

目的本研究通过生物信息学方法预测大肠杆菌O157:H7 Ivy蛋白的潜在B细胞抗原表位,化学合成多肽免疫小鼠,检测多克隆抗体水平及小鼠淋巴细胞增殖情况,探讨Ivy146-157作为多肽疫苗的可行性,为后续研制多肽疫苗及研究大肠杆菌O157:H7的感染机制提供理论依据。方法运用DNAStar软件Protean程序中的Garnier-Robson和Chou-Fasman方法分析Ivy蛋白的α-螺旋、β-折叠、转角区域和卷曲区域。通过Kyte-Doolittle方法、Karplus-Schulz方法、Emini方法和Jameson-Wolf方法分析Ivy蛋白的氨基酸亲水性、蛋白柔性区域、表面可能性和抗原指数,综合分析其潜在优势B细胞抗原表位。选择Ivy蛋白抗原性较高的肽段通过化学合成法合成,并与马来酰胺活化的匙孔血蓝载体蛋白KLH偶联,免疫Balb/c小鼠。三免后第7天分别采集小鼠血清和小鼠脾脏,运用ELISA和Western Bolt方法检测Ivy蛋白多肽的免疫原性,MTT方法检测脾淋巴细胞增殖情况。结果通过生物信息学分析显示Ivy146-157肽段抗原表面可能性及抗原指数高、柔韧性好、亲水性好、无α-螺旋和β-折叠,表现出较高的B细胞抗原表位潜力。Ivy146-157多肽第三次免疫小鼠7天后抗体水平达到1:6400,说明Ivy146-157多肽可以引起小鼠产生较强的免疫反应。制备的Ivy146-157多克隆抗体能够识别天然菌株中的目的蛋白,具有较高特异性,说明合成的Ivy蛋白多肽Ivy146-157具有较好免疫原性。Ivy146-157多肽刺激组与无刺激组比较小鼠脾淋巴增殖差异显著(p<0.05),说明Ivy146-157多肽有较强的刺激机体产生T细胞免疫反应的能力。结论 O157:H7 Ivy146-157多肽免疫小鼠后能够诱导机体产生较高的抗体水平,Ivy146-157多肽刺激小鼠脾淋巴细胞增殖效果显著,说明该多肽能够有效地刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,具有较好的免疫原性。本研究的实验设计和研究结果为EHEC O157:H7多肽疫苗的研制提供了理论基础和实验数据。

引文

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