丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建及免疫研究

详细信息    查看官网全文

• 论文作者：邓娟 ; 罗启慧 ; 陈姗姗 ; 黄超 ; 史良琴 ; 刘文涛 ; 陈正礼
• 年：2016
• 作者机构：四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室;四川农业大学动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室;
• 论文关键词：丙型肝炎 ; 核酸疫苗 ; 构建
• 会议召开时间：2016-08-20
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十九次学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：R392
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十九次学术研讨会
• 会议地点：中国河南郑州
• 主办单位：中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：1
• 文件大小：70k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

本研究以HCV核心蛋白Core、非结构蛋白NS3及NS4B为目的基因,构建核酸疫苗,以期为HCV疫苗的应用研究提供参考。主要研究结果如下:1.丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建采用RT-PCR扩增HCV 2a型JFH1株核心蛋白Core、非结构蛋白NS3及NS4B等基因与pVAX1连接,经酶切与测序鉴定后,构建能表达Core、NS3和NS4B等蛋白的重组质粒pVAX1-Core、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B及融合蛋白的重组质粒pVAX1-Core-NS3-NS4B。对上述4种重组质粒进行PCR和酶切鉴定后,分别以脂质体转染法转染HepG2细胞,采用RT-PCR检测Core、NS3、NS4B及融合蛋白的mRNA在细胞中的表达情况。结果表明,成功构建HCV的4种重组质粒,且能在HepG2细胞中得到表达。2.丙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫研究将重组质粒pVAX1-Core、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B及pVAX1-NS3-Core-NS4B以肌肉注射方式分组免疫(BALB/c小鼠100μg/只),分别在首次免疫、加强免疫和末次免疫后第2周分别进行眼球采血,收集全血及血清冻存。采用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群变化;采用间接酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测小鼠血清中IgG抗体水平及IL-2、IL-4、IFN-γ等细胞因子的分泌水平;采用荧光定量PCR检测血清阻断病毒感染情况。流式细胞术检测结果显示,3次免疫后外周血中T淋巴细胞类型中CD3+、CD4+/CD8+、CD4+细胞数量,pVAX1-NS3-Core-NS4B组高于对照组,有极显著差异(P<0.01);pVAX1-NS4B组和pVAX1-Core组高于对照组,显著性差异(P<0.05)。ELISA检测结果显示,3次免疫后小鼠血清中总IgG水平,pVAX1-NS3组、pVAX1-NS4B组均高于对照组,有极显著差异(P<0.01);血清中IL4水平,pVAX1-Core组高于对照组,有极显著差异(P<0.01);血清中IL2水平,pVAX1-NS3组高于对照组,有极显著差异(P<0.01);血清中IFN-γ水平,pVAX1-NS3-Core-NS4B、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B和pVAX1-Core四个组均高于对照组,有极显著差异(P<0.01)。荧光定量结果显示,与对照组相比,pVAX1-NS3组病毒载量降低,有极显著性差异(P<0.01),pVAX1-NS4B组和pVAX1-Core组病毒载量降低,差异呈显著性(P<0.05)。结论:真核表达质粒pVAX1-Core、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B和pVAX1-NS3-Core-NS4B的成功构建为进一步研究丙型肝炎核酸疫苗奠定了基础。在3次免疫过程中,pVAX1-Core、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B均能诱导体液免疫和持续的细胞免疫应,且在一定程度上阻断病毒侵染,pVAX1-NS3-Core-NS4B主要体现在诱导持续的细胞免疫应答,这将为丙肝核酸疫苗的免疫研究与应用提供依据。

引文