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GST-pulldown联合质谱筛选EtAMA1相互作用蛋白
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摘要
顶复器门原虫是一群专性胞内寄生性原虫,目前研究认为,该类原虫入侵宿主细胞主要包括三个阶段,第一个阶段是虫体顶端与宿主细胞膜之间相互接触后的"滑行"运动;第二个阶段是运动接环的形成,即虫体顶端与宿主细胞形成的紧密接触点然后迅速变成一个环;第三个阶段是带虫空泡的形成。顶体膜抗原-1(Apical membrance antigen 1,AMA1)是由微线体分泌的Ⅰ型跨膜蛋白,由胞质区、跨膜区和胞内区组成。在疟原虫首次报道后,该蛋白在弓形虫、巴贝斯虫、泰勒虫、新孢子虫、球虫等其它顶复器门原虫相继被报道。大量的研究表明,AMA1蛋白与虫体入侵密切相关,通过与棒状体颈部蛋白复合物相互作用形成运动连接环,参与虫体入侵宿主细胞。本实验室首次对鸡柔嫩艾美耳球虫AMA1(EtA MA1)基因特性进行了研究,发现其在子孢子入侵宿主细胞过程中发挥重要的功能,但其作用的分子基础尚不清楚。本研究通过构建带有GST标签的Et AMA1融合表达蛋白,利用GST-pull down联合质谱技术,从柔嫩艾美耳球虫子孢子蛋白质裂解液中筛选出10个与Et AMA1存在潜在相互作用的子孢子蛋白,后续试验中将通过Co IP、BiF C等方法对获得的蛋白进行验证。本研究的结果为阐明Et AMA1的分子生物学功能和作用的分子机制提供新的线索。
引文

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