略阳乌鸡肠道乳酸菌S-层蛋白分离及黏附特性探究

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• 论文作者：李伟 ; 杨明明 ; 杨亚威 ; 吕妍
• 年：2016
• 作者机构：西北农林科技大学动物科技学院;
• 论文关键词：略阳乌鸡 ; 乳酸菌 ; 益生特性 ; 黏附性 ; S-层蛋白
• 会议召开时间：2016-10-21
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：S831
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会
• 会议地点：中国湖北武汉
• 主办单位：中国畜牧兽医学会动物营养学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：1
• 文件大小：44k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

本试验旨在分离略阳乌鸡肠道高黏附性乳酸菌,研究其S-层蛋白对黏附的影响。采用16S rDNA高通量测序检测略阳乌鸡盲、回肠乳酸菌的分布和丰度,并从其盲、回肠内容物中分离乳酸菌,16S rDNA测序鉴定种属。通过黏附性试验筛选高黏附性乳酸菌,分离纯化其S-层蛋白,利用蛋白质谱分析S-层蛋白氨基酸序列并克隆S-层蛋白编码基因。比较去除S-层蛋白的乳酸菌和野生菌的黏附性差异。分离获得5株乳酸菌,分别为卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、阴道乳杆菌(Vaginal lactobacillus)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis);5株乳酸菌的细胞黏附率依次为24.2%、9.9%、6.8%、6.7%、5.0%,卷曲乳杆菌黏附效果最好,将其命名为L crispatus LLY;分离纯化得到L crispatus LLY-4的S-层蛋白,大小约为50 KD,并克隆得到S-层蛋白编码基因sipL;序列分析显示sipL大小为1 395 bp,编码蛋白的理论值51 KD,在NCBI上进行序列同源性分析,结果显示该序列与已报道的卷曲乳杆菌S-层蛋白基因cbsB序列同源性为83%,与cbsA、slpA和是slpB的同源性为37%,由此可知得到的序列是一种新的S-层蛋白基因序列。去除S-层蛋白的L.crispatus LLY-4细胞黏附性大幅度下降,仅为野生菌的39.4%。本试验从略阳乌鸡肠道分离获得一株高黏附性卷曲乳杆菌,克隆获得新的S-层蛋白编码基因sipL,并证明该蛋白是介导卷曲乳杆菌黏附肠道细胞的主要因素。

引文