鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定

详细信息    查看官网全文

• 英文论文题名：Production and characterization of monoclonal antibodies against VP1 protein of DHAV-1a
• 论文作者：傅秋玲 ; 刘伟 ; 黄瑜 ; 傅光华 ; 万春和 ; 程龙飞 ; 陈红梅 ; 施少华 ; 刘荣昌 ; 陈珍 ; 陈翠腾 ; 林建生
• 英文论文作者：FU Qiu-ling ; LIU Wei ; HUANG Yu ; FU Guang-hua ; WAN Chun-he ; CHENG Long-fei ; CHEN Hong-mei ; SHI Shao-hua ; LIU Rong-chang ; CHEN Zhen ; CHEN Cui-teng ; LIN Jian-sheng ; Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine ; Fujian Academy of Agricultural Sciences ; Fujian Animal Diseases Control Technology Development Center ; Fujian Provincial Key Laboratory for Avian Diseases Control and Prevention
• 年：2016
• 作者机构：福建省农业科学院畜牧兽医研究所;福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心;福建省禽病防治重点实验室;
• 论文关键词：鸭1型甲肝病毒亚型 ; 单克隆抗体 ; 生物学特性
• 英文论文关键词：DHAV-1a ; monoclonal antibody ; characterization
• 会议召开时间：2016-11-04
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：S852.65
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会
• 会议地点：中国山东青岛
• 主办单位：中国畜牧兽医学会动物微生态学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：1
• 文件大小：78k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

为制备抗鸭1型甲肝病毒亚型(subtype of duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1a)结构蛋白VP1的单克隆抗体(monoclonal antibodies,MAbs),本研究以pGEX-VP1重组蛋白免疫BALB/C小鼠,同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原建立了筛选抗VP1蛋白阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法,经融合、筛选制备杂交瘤细胞及鉴定MAbs的稳定性、特异性、腹水效价和中和活性等生物学活性,获得了2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1A2和5G3)。MAbs腹水ELISA效价分别为1:2~5×10~3和1:2~(11)×10~3。亚类鉴定均为IgG1/κ型。Western blot表明2株MAbs均能与鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白和DHAV-1a全病毒发生特异性反应。特异性试验表明2株MAbs能与鸭1型甲肝病毒(duck hepatitis A virus type 1,DHAV-1)和DHAV-1a发生交叉反应。中和试验表明其中5G3株具有中和活性。因此,特性鉴定结果表明2株MAbs的ELISA效价均较高、特异性强和稳定性好,均能与DHAV-1和DHAV-1a全病毒发生特异性反应,其中一株具有中和活性。
To prepare the monoclonal antibody(MAb) against of duck hepatitis A virus 1(DHAV-1a),hybridomas were produced by fusing SP2/0 cells with spleen cells from mouse immunized with DHAV-1a pGEX-VP1 recombinant protein.Two hybridoma stable secreting MAbs against VP1 protein was identified by indirect ELISA detection with DHAV-1a as coating antigen.The ascetic fluids of MAbs were 1:2~5×10~3 and 1:2~(11)×10~3,respectively.The MAbs were IgG1 with κchain.Western blot analysis showed that the MAbs could recognize the recombinant VP1 protein and DHAV-la.The neutralization tests showed that one MAb(5G3) has better neutral character.Therefore,Character tests showed that the ELISA titers and specialities of these monoclone antibodies are very good,with excellent stability.In addition,they all have cross interaction with DHAV-1 and DHAV-1a,one of which has good neutrality activity.

引文

[1]Saif Y M.禽病学[M].苏敬良,高福,索勋,译.12版.北京:中国农业出版社,2005:431-443.
    [2]Wildy P.Classification and Nomenclature of Viruses-first report of the international Committee on nomenclature of viruses[M].S Karger(Switzerland)1971.