Ambra1基因在铅诱导的斑马鱼神经发育毒性中的作用

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• 论文作者：柳家贤 ; 屠鸿薇 ; 彭涛 ; 黄颖 ; 黄珊 ; 张博贤 ; 孟晓静
• 年：2016
• 作者机构：南方医科大学公共卫生学院职业卫生与职业医学系;
• 会议召开时间：2016-12-03
• 会议录名称：2016中国毒理学会神经毒理专业委员会学术年会论文集
• 语种：中文
• 分类号：R114
• 学会代码：ZGDV
• 会议名称：2016中国毒理学会神经毒理专业委员会学术年会
• 会议地点：中国北京
• 主办单位：中国毒理学会神经毒理专业委员会
• 学会名称：中国毒理学会
• 页数：1
• 文件大小：64k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

目的:观察铅暴露对斑马鱼胚胎生长发育以及神经行为的影响,并探讨自噬相关基因ambra1在其中的作用。方法:野生型AB品系斑马鱼胚胎给予不同浓度的醋酸铅暴露,检测斑马鱼的24h胚胎自主抽动、48h心率和孵化率以及畸形率、死亡率;电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法检测斑马鱼体内的铅含量;Western Blot法检测各组暴露后48和72h斑马鱼胚胎或幼鱼的LC3-II蛋白水平;ViewPoint Zebrabox行为测试系统观测斑马鱼幼鱼自发运动行为变化;采用吖啶橙(AO)染色法和TUNEL染色分别观察斑马鱼全身和脑部的凋亡状况,并用NBT-Dsred转基因斑马鱼进一步确证铅暴露后神经元凋亡的改变;实时定量PCR检测斑马鱼自噬相关基因beclin1、ambra1a、ambralb、sqstm1、mTOR以及凋亡相关基因bcl-2、tp53、caspase-3、caspase-8、caspase-9的mRNA表达量;用原位杂交法对beclin1、ambra1a、ambra1b的空间表达进行观察。结果:不同剂量组的醋酸铅暴露对斑马鱼24h胚胎自主抽动,48h心率和孵化率没有明显影响;与对照组相比,1和10μmol/L的醋酸铅可使斑马鱼在120h时畸形率分别升高1.0倍(P<0.05)和12.4倍(P<0.01),10μmol/L的铅暴露使斑马鱼在120h时死亡率增高1.3倍(P<0.05);随着铅暴露的浓度和时间的增加,斑马鱼体内的铅含量也呈增加趋势;1和10μmol/L醋酸铅暴露48h和72h时,斑马鱼LC3-Ⅱ水平较对照组均呈现显著下降(P<0.05),其中10μmol/L醋酸铅暴露的作用更加显著(P<0.01),两个剂量组暴露时间至5d时,斑马鱼幼鱼自发运动与对照组相比都明显下降(P<0.05);另外,1和10μmol/L醋酸铅暴露48h和72h斑马鱼头部凋亡点明显增加(P<0.05),而0.1μmol/L铅暴露组较对照组比凋亡点未见明显改变;再者,1和10μmol/L醋酸铅暴露48h和72h后,beclin1、ambra1a、ambra1b的mRNA水平较对照组有显著性下降(P<0.05),但sqstm1、mTOR的mRNA水平未见明显改变,凋亡相关基因bcl-2、tp53、caspase-3、caspase-8、caspase-9的mRNA表达在醋酸铅暴露后48h无明显改变,而10μmol/L醋酸铅暴露72h可使caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA显著性升高(P<0.05);原位杂交结果显示beclin1、ambra1a、ambra1b在斑马鱼胚胎发育至48h和72h以脑部表达为主,但在脑部无明确局限性定位。结论:发育阶段醋酸铅暴露可抑制斑马鱼幼鱼运动,使其运动距离减少,活跃度下降,这些现象可能与下调ambra1a和ambra1bmRNA表达从而抑制斑马鱼自噬水平,增加神经元细胞的凋亡有关。

引文