副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析

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• 论文作者：张飞 ; 都启晶 ; 张洋溢 ; 文心田 ; 黄小波 ; 曹三杰
• 年：2016
• 作者机构：四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心;四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室;农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站;
• 论文关键词：副猪嗜血杆菌 ; 荚膜多糖输出蛋白基因 ; 克隆表达 ; 免疫原性
• 会议召开时间：2016-05-25
• 会议录名称：第七届中国畜牧科技论坛论文集
• 英文会议录名称：Proceeding of the 7th China Animal Husbandry Sci-tech Forum
• 语种：中文
• 分类号：S852.61
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：第七届中国畜牧科技论坛
• 会议地点：中国重庆
• 主办单位：中国畜牧兽医学会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：2
• 文件大小：107k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

(方法)运用PCR方法扩增剐猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(capsularpolysaccharide export protein,CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,用BamHⅠ、XhoⅠ行双酶切获得荚膜多糖输出蛋白基因,与相同方法酶切pET-32a(+)原核表达载体,连接酶切产物,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western-blot分析免疫原性分析,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。(结果)结果显示,成功构建了原核表达质粒pET-32a-CPEP;SDS-PAGE分析结果显示,得到了大小约35 ku的蛋白;Western-blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生了抗原抗体的特异性反应,证实了该重组CPEP蛋白具有免疫原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒,重组蛋白的免疫能够减缓发病并表现出40%的保护率。(结论)重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。

引文