摘要
环境污染物对生物体的氧化应激损伤往往是机体主要的致命因素.因此,生物体的抗氧化防御能力是评价环境污染物毒性作用的有效指标.现有的体内抗氧化防御系统生物标志物的检测存在着指标单一、标准不统一和缺乏综合性等不足之处,难以综合评定污染物的氧化损伤毒性.本项研究以ORAC抗氧化检测方法为基础,建立一种生物体清除自由基能力的检测方法,并应用于生物体氧化应激效应的检测.本项研究选用国际标准试验用鱼-斑马鱼作为试验生物,主要针对过氧自由基(ROO·)进行测定,以偶氮化合物2,2'-偶氮-双-(2-脒基丙烷)氯化二氢(AAPH)作为氧自由基来源,荧光素钠(FL)为荧光指示剂,并以维生素E类似物(Trolox)作为定量标准,观察自由基与荧光素钠作用后其荧光强度的衰减过程,检测各种抗氧化剂加入体系后延缓荧光素钠荧光强度衰减的能力,以此评价抗氧化剂的抗氧化能力.本研究所建立的定量分析方法具有强特异性;精密度在97%-108%之间,相对标准偏差(%RSD)小于15%;准确度高,回收率在97%-108%之间;重现性佳(变异系数是3.09%);此法的定量检出限和最低检测限分别为3.03和1.00 μmol Trolox/mg protein,可接受的相关系数(R2)≥0.99.依据所建立的定量分析方法积累的斑马鱼ORAC生理正常值范围为0-50μmolTrolox/mg protein,并对四种重金属污染物的污染程度和毒性效应进行了评级和分类,提高实验数据互认程度,推动抗氧化防御系统生物标志物在环境污染监测中的应用.