单环刺螠硫醌氧化还原酶的表达、纯化和复性

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• 出版年：2010
• 作者：马玉彬；谭志；张志峰
• 单位1：中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室
• 出生年：1983
• 学历：博士生
• 语种：中文
• 作者关键词：单环刺螠；硫醌氧化还原酶；蛋白表达与纯化；稀释复性
• 起始页：81
• 总页数：6
• 经费资助：国家自然基金面上项目(40776074)资助
• 刊名：中国海洋大学学报
• 是否内版：否
• 刊频：月刊
• 创刊时间：1959
• 主管单位：中华人民共和国教育部
• 主办单位：中国海洋大学
• 主编：管华诗
• 地址：中国海洋大学学报编辑部
• 邮编：266003
• 卷：40
• 期：6
• 期刊索取号：P226.066110-1
• 数据库收录：CA美国《化学文摘》AJ俄罗斯《文摘杂志》 ZR英国《动物学记录》MR美国《数学评论》ZM德国《数学文摘》
• 核心期刊：中国科学技术信息研究所核心期刊 中国科学院文献情报中心核心期刊 北京大学图书馆核心期刊

摘要

硫化物是1种广泛分布的有毒物质。硫醌氧化还原酶(SQR)是硫化物代谢的关键酶。单环刺螠是1种生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物。本研究为了获得具有活性的单环刺螠SQR，将其基因的开放阅读框cDNA克隆到原核表达载体pET28a中，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行重组蛋白的表达，后采用稀释复性的方法对重组蛋白进行复性。经IPTG诱导后该重组蛋白主要以包涵体形式存在。用8mol/L的尿素溶解包涵体后，通过镍离子金属螯合柱纯化获得重组蛋白。首次通过蛋白复性的方法获得具有活性的单环刺螠SQR，确定最佳稀释复性条件为pH=8．0，蛋白浓度20μg/mL，L-精氨酸浓度0.2mol/L，还原型谷胱甘肽∶氧化型谷胱甘肽=10∶1，复性时间为96h。