红曲霉（Monascus spp）莫呐可啉K（Monacol in K）高产菌株的诱变选育及其发酵条件研究
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摘要
从红曲样品中分离筛选得到一株Monacolin K产率较高(高效液相色谱法，HPLC)而桔霉素产率为0.11ng／g(酶联免疫吸附法，ELISA)的红曲霉菌株，编号为M12。以之为出发菌株，通过诱变筛选，获得一株Monacolin K产率有明显提高而桔霉素产率仅为0.13ng／g(ELISA)的突变株，编号为M12-69。对该突变株的液态和固态发酵条件进行初步优化研究。具体包括以下五个方面的内容：
第一，从红曲样品分离纯化获得红曲霉菌株25株，以这些菌株和从中科院购得4株红曲霉菌株，共29株作为菌种，制备得29个(固态)红曲样品。
第二，以上述29个红曲样品为实验材料，对红曲中桔霉素的(单向)薄层层析(STLC)条件进行了研究。结果显示，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸(6：3：1)为展开剂，桔霉素的分离效果较好。按照该方法，对上述29个红曲样品中的桔霉素进行了分析测定，筛选得到6个桔霉素含量低于0.2μg／g的红曲样品及其相应菌株。
以上述6个低桔霉素含量的红曲样品为材料，对Monacolin K的双向薄层层析(DTLC)条件进行了研究。结果显示，以正己烷：乙酸乙酯：无水乙醚：甲酸(20：1：5：0.5)为第一展开剂，正己烷：氯仿：无水乙醚(30：1：5)为第二展开剂，Monacolin K的分离效果较好。以该方法对6个样品中的Monacolin K进行了分析测定，得到1个Monacolin K含量最高为225μg／g(DTLC)的红曲样品及其相应菌株。
为了更准确地判断该红曲样品桔霉素和Monacolin K含量，采用ELISA对桔霉素进行了分析测定，结果显示，该样品中桔霉素含量仅为0.11ng／g。同时，采用HPLC对Monacolin K进行了分析测定，Monacolin K含量为213μg／g。将该样品对应的菌株编号为M12。
通过上述研究，获得1株固态发酵产物Monacolin K产率为213μg／g(HPLC)，桔霉素含量为0.11ng／g(ELISA)的红曲霉菌株M12。
第三，以M12为诱变出发菌株，采用紫外线、~(60)Co—γ射线、硫酸二乙酯
为诱变剂对其进行处理。突变株的桔霉素产率采用STLC分析，MonacolinK
采用DTLC分析，最后获得一株桔霉素产率低且MonacofinK产率有明显提高的突
变株M12一69。以M12一69为菌种制备(固态)红曲，其MonacolinK产率达2143协
9/9(HPLC)，较出发菌株M12提高906.10%，而桔霉素产率仅为0.13 ng/g
(ELISA)，和M12相比，变化不大。
第四，根据Hawkswo曲和Pitt关于红曲霉的分类方法，对M12及M 12一69的培
养物进行了形态观察及分类鉴定。观察发现，M12一69与M12相比有较大的形态差别，
但二者均为丛毛红曲菌(物nascusPl’lo拟5 Sato)。
第五，对红曲霉突变菌株M12一69产MonacofinK的液态和固态发酵条件进行了
初步优化研究。
首先，研究了碳源、氮源、起始pH值、培养温度及时间等因素对M12一69液态发
酵的影响。结果显示，当培养基配方为:4%葡萄糖，0.4%谷氨酸钠，0.3%蛋白膝，
0.3%硝酸按，0.5%磷酸二氢钾，豆芽汁配制，起始pH值为5;培养条件为:25℃，
15or/min，摇床培养12天时，MonacolinK产率达275“g/而(D几C)，桔霉素产率
为0.18n留ml(ELIsA)。在上述培养基和培养条件下，以14L模拟发酵罐进行扩大培
养，接种量为10%(v/v)，通气量为6L/min，转速为200r/min，25℃，培养7天时，
MonacolinK产率达280协9/1111(DTLC)，此时桔霉素产率为o.20ng‘ml(ELISA)。
然后，研究了大米吸水量、培养温度及时间等因素对M12一69固态发酵的影响。
当固态发酵条件为:大米1009，鼓皮19，灭菌，趁热打散冷却后，添加20ml液体培
养基，摇匀，接种，25oC，培养18天时，MonaeolinK产率达2400;9/9(DTLC)，
桔霉素产率仅为。.13n留g(ELISA)，与国内外报道的MonacolinK高产菌株相比，以
M12一69制备的固态红曲中MonacolinK含量与报道的最高水平持平:
A strain of Monascus spp(M12) which produces high Monacolin K(HPLC) and low citrinin was isolated and screened from Hongqu products. Through a series of mutagen tests, A mutant strain of Monascus spp(M 12-69) from Ml2 was acquired, which can produce much higher Monacolin K than M12, and almost same citrinin level as M12. The liquid and solid fermentation conditions of M12-69 were also studied.
The research was accomplished by a five-step procedure.
Ⅰ . 29 strains of Monascus spp were acquired, of which 25 strains were isolated from different Hongqu products and 4 strain were bought from Institute of Microbiology. Chinese Academic of Science. Then 29 Hongqu Samples were prepared with these strains.
Ⅱ. A single direction thin layer chromatography(STLC) was researched in order to detect citrinin from above samples,.The results revealed that ethyll acetate : toluene : formic acid (6:3:1) was a good developer, then the citrinin from the 29 Hongqu samples above were detected, and 6 samples with citrinin less than 0.20 μg/g(STLC) and their strains were screened.
After that, the 6 samples were analysed by a double directions thin layer chromatography (DTLC) with hexane: ethyll acetate: aether: formic acid (20:1 :5:0.5) as the first developer and hexane: chloroform: aether(30:l:5) as the second developer. And the sample with the highest Monacolin K content and its relative strains were acquired .The strain was numbered M12.
Finally, Monacolin K and citrinin in the sample above were precisely detected again by ELISA and HPLC respectively. The results showed that the content of citrinin and Monacolin K from the Hongqu samples produced by M12 were 0.11 ng/g, 213 ,μg/g respectively.
Ⅲ. Physical mutagen treatments including ultraviolet radiation and 60CO- γ- ray and chemical mutagen diethyl suifate were applied to the original strain (M12). A final mutant strain (M12-69) producing low citrinin and 1 higher Monacolin k was obtained. The solid state Hongqu sample was manufactured by the strain M12-69. The Monacolin K content in the sample was 2143 μg/g (HPLC) which represented an increase of 9-time above that of M12 and the citrinin content was only 0.13ng/g (ELISA), almost same level as Ml2.
Ⅳ. Studies on morphological observation and categorization showed that there were several differences between the strain M12 and the mutant strain M12-69, but they both
belong to Monascus Pilosus Sato, according to Hawksworth and Pitt.
Ⅴ. The conditions of the liquid state and solid state fermentation that M12-69 produced Monaclin K were studied.
First, the factors which had an influence on the liquid-state tunning of M12-69 producing Monaclin K were studied, including carbon source, nitrogen source, initial pH value, culture temperature and time. The results indicated that Monaclin K content was 275 μg/ml(DTLC) and citrinin content was 0.18ng/ml when the culture medium was as follows: 4% glucose, 0.4% soda glutamate, 0.3% peptone. 0.3% NH4NO3, 0.5% NaH2PO4, dissolved with bean sprouts, initial pH was 5 and the culture condition was as follows: 25 ℃, 150r/min, incubated on shaker, 12 days. Then the same culture medium and fermentation condition were also applied to amplified fermentation in the modular research fermentater with the volume of 14L. Other conditions were as follows: inoculation concentration 10%(v/v), aeration quantity 6L/min, rotational speed 200r/min. 25℃. After 7 days incubation, it's detected that the content of Monaclin K was 280 μ g/ml(DTLC) and citrinin content was 0.20ng/ml(ELISA).
Second, the factors which had an influence on the solid-state tunning of M12-69 were studied too. including the water amount of rice, culture temperature and culture time. The results indicated that the content of Monaclin K was 2400 μ g/g(DTLC) and the content of citrinin was only 0.13ng/g(ELISA) when the solid-state fermentation conditions were as follows, 100g rice that absorbed 50g water, wheat bran 1g, dispersed immediately after steriliztation. then 20ml bacteria-free liquid-state medium were a
第一，从红曲样品分离纯化获得红曲霉菌株25株，以这些菌株和从中科院购得4株红曲霉菌株，共29株作为菌种，制备得29个(固态)红曲样品。
第二，以上述29个红曲样品为实验材料，对红曲中桔霉素的(单向)薄层层析(STLC)条件进行了研究。结果显示，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸(6：3：1)为展开剂，桔霉素的分离效果较好。按照该方法，对上述29个红曲样品中的桔霉素进行了分析测定，筛选得到6个桔霉素含量低于0.2μg／g的红曲样品及其相应菌株。
以上述6个低桔霉素含量的红曲样品为材料，对Monacolin K的双向薄层层析(DTLC)条件进行了研究。结果显示，以正己烷：乙酸乙酯：无水乙醚：甲酸(20：1：5：0.5)为第一展开剂，正己烷：氯仿：无水乙醚(30：1：5)为第二展开剂，Monacolin K的分离效果较好。以该方法对6个样品中的Monacolin K进行了分析测定，得到1个Monacolin K含量最高为225μg／g(DTLC)的红曲样品及其相应菌株。
为了更准确地判断该红曲样品桔霉素和Monacolin K含量，采用ELISA对桔霉素进行了分析测定，结果显示，该样品中桔霉素含量仅为0.11ng／g。同时，采用HPLC对Monacolin K进行了分析测定，Monacolin K含量为213μg／g。将该样品对应的菌株编号为M12。
通过上述研究，获得1株固态发酵产物Monacolin K产率为213μg／g(HPLC)，桔霉素含量为0.11ng／g(ELISA)的红曲霉菌株M12。
第三，以M12为诱变出发菌株，采用紫外线、~(60)Co—γ射线、硫酸二乙酯
为诱变剂对其进行处理。突变株的桔霉素产率采用STLC分析，MonacolinK
采用DTLC分析，最后获得一株桔霉素产率低且MonacofinK产率有明显提高的突
变株M12一69。以M12一69为菌种制备(固态)红曲，其MonacolinK产率达2143协
9/9(HPLC)，较出发菌株M12提高906.10%，而桔霉素产率仅为0.13 ng/g
(ELISA)，和M12相比，变化不大。
第四，根据Hawkswo曲和Pitt关于红曲霉的分类方法，对M12及M 12一69的培
养物进行了形态观察及分类鉴定。观察发现，M12一69与M12相比有较大的形态差别，
但二者均为丛毛红曲菌(物nascusPl’lo拟5 Sato)。
第五，对红曲霉突变菌株M12一69产MonacofinK的液态和固态发酵条件进行了
初步优化研究。
首先，研究了碳源、氮源、起始pH值、培养温度及时间等因素对M12一69液态发
酵的影响。结果显示，当培养基配方为:4%葡萄糖，0.4%谷氨酸钠，0.3%蛋白膝，
0.3%硝酸按，0.5%磷酸二氢钾，豆芽汁配制，起始pH值为5;培养条件为:25℃，
15or/min，摇床培养12天时，MonacolinK产率达275“g/而(D几C)，桔霉素产率
为0.18n留ml(ELIsA)。在上述培养基和培养条件下，以14L模拟发酵罐进行扩大培
养，接种量为10%(v/v)，通气量为6L/min，转速为200r/min，25℃，培养7天时，
MonacolinK产率达280协9/1111(DTLC)，此时桔霉素产率为o.20ng‘ml(ELISA)。
然后，研究了大米吸水量、培养温度及时间等因素对M12一69固态发酵的影响。
当固态发酵条件为:大米1009，鼓皮19，灭菌，趁热打散冷却后，添加20ml液体培
养基，摇匀，接种，25oC，培养18天时，MonaeolinK产率达2400;9/9(DTLC)，
桔霉素产率仅为。.13n留g(ELISA)，与国内外报道的MonacolinK高产菌株相比，以
M12一69制备的固态红曲中MonacolinK含量与报道的最高水平持平:
A strain of Monascus spp(M12) which produces high Monacolin K(HPLC) and low citrinin was isolated and screened from Hongqu products. Through a series of mutagen tests, A mutant strain of Monascus spp(M 12-69) from Ml2 was acquired, which can produce much higher Monacolin K than M12, and almost same citrinin level as M12. The liquid and solid fermentation conditions of M12-69 were also studied.
The research was accomplished by a five-step procedure.
Ⅰ . 29 strains of Monascus spp were acquired, of which 25 strains were isolated from different Hongqu products and 4 strain were bought from Institute of Microbiology. Chinese Academic of Science. Then 29 Hongqu Samples were prepared with these strains.
Ⅱ. A single direction thin layer chromatography(STLC) was researched in order to detect citrinin from above samples,.The results revealed that ethyll acetate : toluene : formic acid (6:3:1) was a good developer, then the citrinin from the 29 Hongqu samples above were detected, and 6 samples with citrinin less than 0.20 μg/g(STLC) and their strains were screened.
After that, the 6 samples were analysed by a double directions thin layer chromatography (DTLC) with hexane: ethyll acetate: aether: formic acid (20:1 :5:0.5) as the first developer and hexane: chloroform: aether(30:l:5) as the second developer. And the sample with the highest Monacolin K content and its relative strains were acquired .The strain was numbered M12.
Finally, Monacolin K and citrinin in the sample above were precisely detected again by ELISA and HPLC respectively. The results showed that the content of citrinin and Monacolin K from the Hongqu samples produced by M12 were 0.11 ng/g, 213 ,μg/g respectively.
Ⅲ. Physical mutagen treatments including ultraviolet radiation and 60CO- γ- ray and chemical mutagen diethyl suifate were applied to the original strain (M12). A final mutant strain (M12-69) producing low citrinin and 1 higher Monacolin k was obtained. The solid state Hongqu sample was manufactured by the strain M12-69. The Monacolin K content in the sample was 2143 μg/g (HPLC) which represented an increase of 9-time above that of M12 and the citrinin content was only 0.13ng/g (ELISA), almost same level as Ml2.
Ⅳ. Studies on morphological observation and categorization showed that there were several differences between the strain M12 and the mutant strain M12-69, but they both
belong to Monascus Pilosus Sato, according to Hawksworth and Pitt.
Ⅴ. The conditions of the liquid state and solid state fermentation that M12-69 produced Monaclin K were studied.
First, the factors which had an influence on the liquid-state tunning of M12-69 producing Monaclin K were studied, including carbon source, nitrogen source, initial pH value, culture temperature and time. The results indicated that Monaclin K content was 275 μg/ml(DTLC) and citrinin content was 0.18ng/ml when the culture medium was as follows: 4% glucose, 0.4% soda glutamate, 0.3% peptone. 0.3% NH4NO3, 0.5% NaH2PO4, dissolved with bean sprouts, initial pH was 5 and the culture condition was as follows: 25 ℃, 150r/min, incubated on shaker, 12 days. Then the same culture medium and fermentation condition were also applied to amplified fermentation in the modular research fermentater with the volume of 14L. Other conditions were as follows: inoculation concentration 10%(v/v), aeration quantity 6L/min, rotational speed 200r/min. 25℃. After 7 days incubation, it's detected that the content of Monaclin K was 280 μ g/ml(DTLC) and citrinin content was 0.20ng/ml(ELISA).
Second, the factors which had an influence on the solid-state tunning of M12-69 were studied too. including the water amount of rice, culture temperature and culture time. The results indicated that the content of Monaclin K was 2400 μ g/g(DTLC) and the content of citrinin was only 0.13ng/g(ELISA) when the solid-state fermentation conditions were as follows, 100g rice that absorbed 50g water, wheat bran 1g, dispersed immediately after steriliztation. then 20ml bacteria-free liquid-state medium were a
引文
1．丁婷林 刘志林 洛伐他汀胶囊含量测定方法比较 黑龙江医药 2000 4：198～199
2．大连轻工业学院 华南理工大学 郑州轻工业学院等 食品分析 北京：中国轻工业出版 1994
3．马美荣 诸葛健 红曲红 中国食品添加剂 1999 3：65～67
4．马美荣 樊游等 降胆固醇红曲霉菌种的筛选 无锡轻工大学学报 1999 3：66-69
5．中国科学院微生物研究所 微生物资料汇编第六集 北京：科学出版社 1972
6．尤新 功能性发酵食品 北京：中国轻工业出版社 2000
7．文镜 顾小玲 双波长紫外分光光度法测定红曲中洛伐它汀的含量 2000年东方红曲国际学术研讨会论文集(一)
8．文镜 顾小玲 双波长紫外分光光度法测定红曲中洛伐它汀的含量 中国食品添加剂 2000 4：11～16
9．文镜 常平 顾晓林 红曲洛伐它汀的生理活性和测定方法研究进展 中国食品添加剂 2001 3：7-14
10．方元超 杨柳 红曲霉研究进展 江苏食品与发酵 1999 1：19-24
11．日本土壤微生物研究会 土壤微生物实验法北京：科学出版社 1983
12．毛宁 陈松生 红曲霉有效生理活性物质及其应用 中国调味品 1995 4：8-11
13．毛宁 陈松生 降脂红曲霉的生产研究 中国酿造 1997 5：14～17
14．王文仲 应用微生物学 北京：中国医药科技出版社 1996
15．王立新 莫海涛 石红 红曲霉固态发酵生产洛饯它汀的研究 中国抗生素杂志 1999 2：96-98
16．王光亚 保健食品功效成分检测方法 北京：中国轻工业出版社 2002 46-52
17．王岳五 陈宁编译 微生物遗传学与实验教程 天津：南开大学出版社 1989
18．王雅芬 傅月华 红曲霉的有效生理活性物质及应用 杭州科技 2000 5：25～27
19．代春华 谢东扬 红曲代谢产物及其药用功能 中草药 1999 10：797～798
20．任世宣 程安江 陈显群 红曲色素水溶性方法 工业微生物 1991 6：17～19
21．刘永华 徐文生 国内外红曲研究的现状及进展 酿酒科技 1997 4：29～30
22．孙考祥 吴琳华 胡君茹 夏相高效液相色谱法测定洛伐他汀的血浆药物浓度 药物分析杂志 1998 3：165～167
23．庄桂 红曲及其生理活性物质的研究与应用 郑州粮食学院学报 1996 4：44～50
24．许赣荣 陈蕴 虞慧玲 高效液相色谱法测定红曲莫纳可啉及桔霉素 食品与发酵工业 2002 10：59～65a
25．许赣荣 浅谈红曲霉桔霉素 酿酒科技 1999 3：20～22
26．许赣荣 陈蕴 顾玉梅 低产桔霉素红曲霉菌种筛选 无锡轻工大学学报 2000 4：358～360
27．许赣荣 傅金泉 红曲产品在欧洲的合法地位、菌种分类及有害物质桔霉素许赣荣 中国酿造1998 5：6～10
28．何丽一 平面色谱方法及应用 北京：化学工业出版社 2000 162
29．宋洪涛 郭涛 薄层扫描法测定血脂平胶囊中洛伐它汀的含量 中草药 1997 12：723～725
30．张小茜 周富荣 石济民 高效液相色谱法测血脂康胶囊及红曲中洛伐他汀的含量 中国中药杂志 1997 4：222～224
31．张红艳 侯团章 高效液相色谱法测定红曲米中洛伐它汀的含量 食品科学 2001 7：67～69
32．张惠霞 李平 紫外分光光度法测定洛伐它汀片的含量 药物分析杂志 1999 1：60～61
33．李云 阎秋雪 李枚秋 红曲与桔霉素 食品与发酵工业 1999 3：82～86
34．李兰生 吴俊龙 反相色谱法测定洛伐他汀含量的方法 青岛化工学院学报 1999 4：354-356
35．李钟庆 郭芳 红曲菌属的分类 2000年东方红曲国际学术研讨会论文集(一)2000
36．杜连祥等 工业微生物学实验技术 天津：天津科学技术出版社 1992
37．杨昭中 羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂研究进展 中国抗生素杂志 1990 6：455～462
38．沈同 王镜岩 生物化学(下册)北京：高等教育出版社 1991
39．苏学惠 新型降血脂药物—羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂 国外医药抗生素分册 1994 4：305～308
40．邵力平 真菌分类学 北京：中国林业出版社 1984
41．陈代杰 微生物药物学 上海：华东理工大学出版社 1999
42．陈蕴 许赣荣 顾玉枚 TLC及HPLC测定红曲产品中的桔霉素 无锡轻工大学学报 2001 2：164～168
43．孟昭赫 张国柱 宋圃菊 真菌毒素研究进展 北京：人民卫生出版社 1979
44．武汉大学 复旦大学生物系微生物教研室编 微生物学(第二版)北京：高等教育出版社 1990
45．宫慧梅 赵树欣 邹海晏 用双向薄层层析检测红曲中的桔霉素 2002 2：83～84
46．洪智勇 毛宁 红曲霉降胆固醇有效成分的研究 海峡药学 2002 1：32～34
47．胡晓清 陈福生 邢淑婕 刘畅 红曲中桔霉素的薄层层析分析 食品科学 2003 (a) 24(5)：126～129
48．胡晓清 袁梦仙 陈福生 王汝毅 周有祥 双向薄层层析测定红曲中Monacolin K中国酿造 2003(b)(已接受)
49．赵飞浪 袁倚盛 沈学英PR-HPLC测定人血浆中洛伐他汀浓度及药动学研究 中国药科大学 学报 1997 5：288～290
50．赵海 古老而又现代的食品精粹——产品质量，桔霉素的控制 中国食品报 2001 3 9
51．钟顺昌Park H 依据rRNA基因大亚基D1／D2区段的核苷酸顺序(LSU)对ATCC所保藏的红曲霉菌株进行鉴定 2000年东方红曲国际学术研讨会论文集(一)16～26
52．徐振华 吕玉东 蔡亚辉 刘鸽 HPLC法对洛伐他汀有关物质的测定方法研究 中国医药情报 1999 4：256～257
53．莫湘涛 张梅芬 陈福星 水溶性红曲色素研究 湖南师范大学自然科学学报 1998 21(2)：76～19
54．贾波 孙柏申 HPLC法测定红曲霉发酵样品中Monacolin K的含量食品与发酵工业 2003 29(1)：70～73
55．郭东川 吴诚华 李钟庆 红曲色素的两种新结构 真菌学报 1993 12(1)：65～70
56．顾玉梅 许赣荣 陈蕴 红曲霉菌9903发酵工艺条件对色素及桔霉素生产的影响 食品与生物技术 2002 1：43～47
57．高嘉安 郭东 产Monacolin K红曲霉菌的筛选及发酵条件的研究 吉林农业大学学报 1997 3：85～90
58．高嘉安 郭东 红曲霉生理活性物质的检测 吉林农业大学学报 1996 4：93～96
59．常华 王元太 红曲霉的生理活性物质及其应用前景的分析 山西食品工业 2001 2：16～19
60．傅金泉 中国红曲及其实用技术北京：中国轻工业出版社 1997
61．赖卫华 许杨 红曲霉产桔霉素的研究进展 食品科学 2002 7：139～141
62．路秀玲 赵树欣 红曲保健食品的市场分析 ’2000东方红曲国际学术研讨会论文集(一)2000
63．熊宗贵 发酵工艺原理 北京：中国医药科技出版社 1995
64．蔡晶晶 李季伦 土曲霉(Aspergillus terreus)产生洛伐它汀(Lovastatin)的研究 微生物学杂志 2000 4：1-4
65．颜方贵 发酵微生物学 北京：北京农业大学出版社 1993
66．魏景超 真菌鉴定手册 上海：上海科学技术出版社 1979
67. Abramson B, Usleber E & Martlbauer E An Indirect Enzyme for the Mycotoxin Citrinin Applied And Environmental Microbiology 1995 61(5):2007～2009
68. Endo A Monacolin K, A New Hypocholesterolemic Agent Produced by a Monascus Species The Journal of Antibiotics 1979 32(8):852～854
69. Endo A & Yamashita H Microbial Phosphorylation of Compactin and Related Compounds The Journal of Antibiotics 1985(a) 38:328～332
70. Endo A. Hasumi K, Nakamura T. Kunishima M & Masuda M Dihydromonacolin L and Monacolin X. New Metabolites Those Inhibit Cholesterol Biosynthesis The Journal of Antibiotics 1985(b) 38:321～327
71. Endo A, Kuroda M & Tsujita Y ML-236A, ML-236B, and ML-236C, New Inhibitor of Cholesteroge- nesis Produced by Penccillium Citrinum The Journal of Antibiotics 1976 29(12): 1346～1348
72. Endo A, Negishi Y, Iwashita T Mizukawa K & Hirama M Biosynthesis of ML-236B and Monacolin K The Journal of Antibiotics 1985(c) 38:444～448
73. Endo A. Monacolin K, A New Hypocholesterolemic Agent that Specially Inhibits 3-hydro -xy-3- methyl-glutaryl Coenzyme A Reductase The Journal of Antibiotics 1980 33(3): 334～336
74. Friedrich J, Zuzek M, Bencina M, Cimerman A. Strancar A & Radez I High-performance Liquid Chromatographic Analysis of Mevinolin as Mevinolinic Acid in Fermentation Broths Journal of Chromatography A 1995 704:363～367
75. Gvincent P G. Robert T G, Irving P & Yiu-Kuen Lam HPLC Analysis of Derivatized Hypocholesteremic Agents from Fermented Broths Journal of Chromatography A 1981 212 234～238
76. Hawksworth D L & Pitt J I A New Taxonomy for Monascus Species based on Cultural and Microscopical Characters Australia Journal of Botany 1983 31 51～61
77. Kysilka B & Kren V Determinmion of Lovastatin(mevinolin) and Mevinolinic Acid in Fermentation Liquids Journal of Chromatography A 1993 630:415～417
78. Serizawa N, Nakagawa K, Tsujita Y, Terahara A Kuwano H & Tanaka M 6a-Hydroxy-ISO-ML-236B and ML- 236A, Microbial Transformation Products of ML-236B The Journal of Antibiotics 1983(a) 36:918～920
79. Serizawa N, Nakagawa K, Tsujita Y, Terahara A. & Kuwano H 3a-Hydroxy-iso-ML-236B. Microbial Transformaton Products of ML-236B The Journal of Antibiotics 1983(b) 36:608～610
80. Wong Hinchung & Koehler Production and Isolation of an Antibiotic from Monascus purpureus and Its Relationship to Pigment Production Journal of Food Science 1981 46:589～592
2．大连轻工业学院 华南理工大学 郑州轻工业学院等 食品分析 北京：中国轻工业出版 1994
3．马美荣 诸葛健 红曲红 中国食品添加剂 1999 3：65～67
4．马美荣 樊游等 降胆固醇红曲霉菌种的筛选 无锡轻工大学学报 1999 3：66-69
5．中国科学院微生物研究所 微生物资料汇编第六集 北京：科学出版社 1972
6．尤新 功能性发酵食品 北京：中国轻工业出版社 2000
7．文镜 顾小玲 双波长紫外分光光度法测定红曲中洛伐它汀的含量 2000年东方红曲国际学术研讨会论文集(一)
8．文镜 顾小玲 双波长紫外分光光度法测定红曲中洛伐它汀的含量 中国食品添加剂 2000 4：11～16
9．文镜 常平 顾晓林 红曲洛伐它汀的生理活性和测定方法研究进展 中国食品添加剂 2001 3：7-14
10．方元超 杨柳 红曲霉研究进展 江苏食品与发酵 1999 1：19-24
11．日本土壤微生物研究会 土壤微生物实验法北京：科学出版社 1983
12．毛宁 陈松生 红曲霉有效生理活性物质及其应用 中国调味品 1995 4：8-11
13．毛宁 陈松生 降脂红曲霉的生产研究 中国酿造 1997 5：14～17
14．王文仲 应用微生物学 北京：中国医药科技出版社 1996
15．王立新 莫海涛 石红 红曲霉固态发酵生产洛饯它汀的研究 中国抗生素杂志 1999 2：96-98
16．王光亚 保健食品功效成分检测方法 北京：中国轻工业出版社 2002 46-52
17．王岳五 陈宁编译 微生物遗传学与实验教程 天津：南开大学出版社 1989
18．王雅芬 傅月华 红曲霉的有效生理活性物质及应用 杭州科技 2000 5：25～27
19．代春华 谢东扬 红曲代谢产物及其药用功能 中草药 1999 10：797～798
20．任世宣 程安江 陈显群 红曲色素水溶性方法 工业微生物 1991 6：17～19
21．刘永华 徐文生 国内外红曲研究的现状及进展 酿酒科技 1997 4：29～30
22．孙考祥 吴琳华 胡君茹 夏相高效液相色谱法测定洛伐他汀的血浆药物浓度 药物分析杂志 1998 3：165～167
23．庄桂 红曲及其生理活性物质的研究与应用 郑州粮食学院学报 1996 4：44～50
24．许赣荣 陈蕴 虞慧玲 高效液相色谱法测定红曲莫纳可啉及桔霉素 食品与发酵工业 2002 10：59～65a
25．许赣荣 浅谈红曲霉桔霉素 酿酒科技 1999 3：20～22
26．许赣荣 陈蕴 顾玉梅 低产桔霉素红曲霉菌种筛选 无锡轻工大学学报 2000 4：358～360
27．许赣荣 傅金泉 红曲产品在欧洲的合法地位、菌种分类及有害物质桔霉素许赣荣 中国酿造1998 5：6～10
28．何丽一 平面色谱方法及应用 北京：化学工业出版社 2000 162
29．宋洪涛 郭涛 薄层扫描法测定血脂平胶囊中洛伐它汀的含量 中草药 1997 12：723～725
30．张小茜 周富荣 石济民 高效液相色谱法测血脂康胶囊及红曲中洛伐他汀的含量 中国中药杂志 1997 4：222～224
31．张红艳 侯团章 高效液相色谱法测定红曲米中洛伐它汀的含量 食品科学 2001 7：67～69
32．张惠霞 李平 紫外分光光度法测定洛伐它汀片的含量 药物分析杂志 1999 1：60～61
33．李云 阎秋雪 李枚秋 红曲与桔霉素 食品与发酵工业 1999 3：82～86
34．李兰生 吴俊龙 反相色谱法测定洛伐他汀含量的方法 青岛化工学院学报 1999 4：354-356
35．李钟庆 郭芳 红曲菌属的分类 2000年东方红曲国际学术研讨会论文集(一)2000
36．杜连祥等 工业微生物学实验技术 天津：天津科学技术出版社 1992
37．杨昭中 羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂研究进展 中国抗生素杂志 1990 6：455～462
38．沈同 王镜岩 生物化学(下册)北京：高等教育出版社 1991
39．苏学惠 新型降血脂药物—羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂 国外医药抗生素分册 1994 4：305～308
40．邵力平 真菌分类学 北京：中国林业出版社 1984
41．陈代杰 微生物药物学 上海：华东理工大学出版社 1999
42．陈蕴 许赣荣 顾玉枚 TLC及HPLC测定红曲产品中的桔霉素 无锡轻工大学学报 2001 2：164～168
43．孟昭赫 张国柱 宋圃菊 真菌毒素研究进展 北京：人民卫生出版社 1979
44．武汉大学 复旦大学生物系微生物教研室编 微生物学(第二版)北京：高等教育出版社 1990
45．宫慧梅 赵树欣 邹海晏 用双向薄层层析检测红曲中的桔霉素 2002 2：83～84
46．洪智勇 毛宁 红曲霉降胆固醇有效成分的研究 海峡药学 2002 1：32～34
47．胡晓清 陈福生 邢淑婕 刘畅 红曲中桔霉素的薄层层析分析 食品科学 2003 (a) 24(5)：126～129
48．胡晓清 袁梦仙 陈福生 王汝毅 周有祥 双向薄层层析测定红曲中Monacolin K中国酿造 2003(b)(已接受)
49．赵飞浪 袁倚盛 沈学英PR-HPLC测定人血浆中洛伐他汀浓度及药动学研究 中国药科大学 学报 1997 5：288～290
50．赵海 古老而又现代的食品精粹——产品质量，桔霉素的控制 中国食品报 2001 3 9
51．钟顺昌Park H 依据rRNA基因大亚基D1／D2区段的核苷酸顺序(LSU)对ATCC所保藏的红曲霉菌株进行鉴定 2000年东方红曲国际学术研讨会论文集(一)16～26
52．徐振华 吕玉东 蔡亚辉 刘鸽 HPLC法对洛伐他汀有关物质的测定方法研究 中国医药情报 1999 4：256～257
53．莫湘涛 张梅芬 陈福星 水溶性红曲色素研究 湖南师范大学自然科学学报 1998 21(2)：76～19
54．贾波 孙柏申 HPLC法测定红曲霉发酵样品中Monacolin K的含量食品与发酵工业 2003 29(1)：70～73
55．郭东川 吴诚华 李钟庆 红曲色素的两种新结构 真菌学报 1993 12(1)：65～70
56．顾玉梅 许赣荣 陈蕴 红曲霉菌9903发酵工艺条件对色素及桔霉素生产的影响 食品与生物技术 2002 1：43～47
57．高嘉安 郭东 产Monacolin K红曲霉菌的筛选及发酵条件的研究 吉林农业大学学报 1997 3：85～90
58．高嘉安 郭东 红曲霉生理活性物质的检测 吉林农业大学学报 1996 4：93～96
59．常华 王元太 红曲霉的生理活性物质及其应用前景的分析 山西食品工业 2001 2：16～19
60．傅金泉 中国红曲及其实用技术北京：中国轻工业出版社 1997
61．赖卫华 许杨 红曲霉产桔霉素的研究进展 食品科学 2002 7：139～141
62．路秀玲 赵树欣 红曲保健食品的市场分析 ’2000东方红曲国际学术研讨会论文集(一)2000
63．熊宗贵 发酵工艺原理 北京：中国医药科技出版社 1995
64．蔡晶晶 李季伦 土曲霉(Aspergillus terreus)产生洛伐它汀(Lovastatin)的研究 微生物学杂志 2000 4：1-4
65．颜方贵 发酵微生物学 北京：北京农业大学出版社 1993
66．魏景超 真菌鉴定手册 上海：上海科学技术出版社 1979
67. Abramson B, Usleber E & Martlbauer E An Indirect Enzyme for the Mycotoxin Citrinin Applied And Environmental Microbiology 1995 61(5):2007～2009
68. Endo A Monacolin K, A New Hypocholesterolemic Agent Produced by a Monascus Species The Journal of Antibiotics 1979 32(8):852～854
69. Endo A & Yamashita H Microbial Phosphorylation of Compactin and Related Compounds The Journal of Antibiotics 1985(a) 38:328～332
70. Endo A. Hasumi K, Nakamura T. Kunishima M & Masuda M Dihydromonacolin L and Monacolin X. New Metabolites Those Inhibit Cholesterol Biosynthesis The Journal of Antibiotics 1985(b) 38:321～327
71. Endo A, Kuroda M & Tsujita Y ML-236A, ML-236B, and ML-236C, New Inhibitor of Cholesteroge- nesis Produced by Penccillium Citrinum The Journal of Antibiotics 1976 29(12): 1346～1348
72. Endo A, Negishi Y, Iwashita T Mizukawa K & Hirama M Biosynthesis of ML-236B and Monacolin K The Journal of Antibiotics 1985(c) 38:444～448
73. Endo A. Monacolin K, A New Hypocholesterolemic Agent that Specially Inhibits 3-hydro -xy-3- methyl-glutaryl Coenzyme A Reductase The Journal of Antibiotics 1980 33(3): 334～336
74. Friedrich J, Zuzek M, Bencina M, Cimerman A. Strancar A & Radez I High-performance Liquid Chromatographic Analysis of Mevinolin as Mevinolinic Acid in Fermentation Broths Journal of Chromatography A 1995 704:363～367
75. Gvincent P G. Robert T G, Irving P & Yiu-Kuen Lam HPLC Analysis of Derivatized Hypocholesteremic Agents from Fermented Broths Journal of Chromatography A 1981 212 234～238
76. Hawksworth D L & Pitt J I A New Taxonomy for Monascus Species based on Cultural and Microscopical Characters Australia Journal of Botany 1983 31 51～61
77. Kysilka B & Kren V Determinmion of Lovastatin(mevinolin) and Mevinolinic Acid in Fermentation Liquids Journal of Chromatography A 1993 630:415～417
78. Serizawa N, Nakagawa K, Tsujita Y, Terahara A Kuwano H & Tanaka M 6a-Hydroxy-ISO-ML-236B and ML- 236A, Microbial Transformation Products of ML-236B The Journal of Antibiotics 1983(a) 36:918～920
79. Serizawa N, Nakagawa K, Tsujita Y, Terahara A. & Kuwano H 3a-Hydroxy-iso-ML-236B. Microbial Transformaton Products of ML-236B The Journal of Antibiotics 1983(b) 36:608～610
80. Wong Hinchung & Koehler Production and Isolation of an Antibiotic from Monascus purpureus and Its Relationship to Pigment Production Journal of Food Science 1981 46:589～592