旱稻种质类缘鉴别与遗传基础RAPD分析
摘要
本研究初步确立了32份稻作（主要是旱稻）在籼、粳亚种中的分类地位，
其中有9份属于籼稻，13份偏籼，4份偏粳，6份粳稻。还对部分旱稻种质进
行了农艺特征观察，对产量性状与7个数量性状间的相关进行测验，得到了单
株产量的直线回归方程，回归直线的F测验达极显著。
硅胶干燥水旱稻叶片适于总基因组DNA提取，所提取的DNA分子量在45kb
左右，能成功用于RAPD扩增。经优化组合，水旱稻RAPD的最佳反应体系为：
50～100ng DNA模板，1.2U的Taq酶，2.5mmol/L的Mg~(2+)，0.25mmol/L的
dNTPs，0.5μmol/L引物，10mmol/L Tris-Cl（pH8.0），50mmol/L KCl，0.1％
明胶，反应终体积为20μL。10个引物共获得99条清晰可辨的条带，其中93
条为多态性条带，占总扩增片段的93.9％，所扩增的片段在0.2～3.0kb间。
不同引物扩增的条带数在5～14条，平均为9.9条。各种质间的遗传距离在
0.11～0.75间，平均为0.35。引物S60、S80、S1308和S1319能将42份稻种
质全部区分开来，但没有获得水、旱稻，籼、粳稻种群间及不同地域种质的特
异标记带，因而在聚类中，籼、粳亚种也没有明显聚类界线。说明RAPD标记只
能在一定程度上鉴别稻种质或品种，而不能作为籼粳型分化标记。引物S80所
产生的一条约1.0kb、一条约0.8kb的带（新旱2号的特异标记带），S1308产
生一条约2.7kb，是旱稻新品系系列所特有。S80还产生一条约1.5kb的带，
是籼稻所特有（个别非典型的粳稻也具有）。S1319所产生的一条约2.5kb的
带，为香珍矮的特异标记带，没有获得其它种质的特异标记带。
Abstract
The classification position of 32 rices in intersubspecies of rice was initially established. Nine of the above rices were Hsien or Indica, thirteen were partial lndica, four were partial Keng or Japonica and six were Japonica. Agronomic character inspection on some upland rices was made. The regression analysis and line regrssion equation between the yield and 7 quantity characters were carried out.
The preparation method of DNA from the silica-gel-dried leaves of rice and upland rice was studied. The DNA with the length of 45 kb and yield of 50?170 ~t g/g have been acquired, which could be used successfully for conducting PCR. RAPD PCR was run in a reaction volume of 20 t.t L containing 50---- 100 ng template DNA, 1.2 Unit of Taq DNA polymerase, 2.5 mmol/L Mgcl2, 250 ii mol/L dNTPs, 0.5 ii mol/L primer, 10 mmol/L Tris-HC1(pH 8.0), 50 mmol/L KCI and 0.1% gelatin.
42 DNA samples were amplified for random amplified polymorphic DNA analysis with 10 random primers, and 93 polymorphic bands were obtained. The amplified fragments ranged from 0.2 to 3 kb and the genetic distance of them ranges from 0.11 to 0.75. The fingerprints of 42 rices was getted. The result of the finger profile analysis and UPGMA cluster analysis indicated that RAPD only can identify rice species to some extent, but can’t be intersubspecific marker. 42 rices can be differentiated from each other with 560, S80, Si 308 and S 1319. The acquisition of special bands of rice and upland rice, intersubspecific groups and all types of ecological species was failed. Bands of about 1.0 kb, 800 bp and 2.7 kb conducted by S80 and S 1308 were special marker bands of ew-varieties? Bands of some 1.5 kb and 2.5 kb respectively by S80 and Si 319 was special marker bands of lndica and Xiangzhenai? respectively.
其中有9份属于籼稻，13份偏籼，4份偏粳，6份粳稻。还对部分旱稻种质进
行了农艺特征观察，对产量性状与7个数量性状间的相关进行测验，得到了单
株产量的直线回归方程，回归直线的F测验达极显著。
硅胶干燥水旱稻叶片适于总基因组DNA提取，所提取的DNA分子量在45kb
左右，能成功用于RAPD扩增。经优化组合，水旱稻RAPD的最佳反应体系为：
50～100ng DNA模板，1.2U的Taq酶，2.5mmol/L的Mg~(2+)，0.25mmol/L的
dNTPs，0.5μmol/L引物，10mmol/L Tris-Cl（pH8.0），50mmol/L KCl，0.1％
明胶，反应终体积为20μL。10个引物共获得99条清晰可辨的条带，其中93
条为多态性条带，占总扩增片段的93.9％，所扩增的片段在0.2～3.0kb间。
不同引物扩增的条带数在5～14条，平均为9.9条。各种质间的遗传距离在
0.11～0.75间，平均为0.35。引物S60、S80、S1308和S1319能将42份稻种
质全部区分开来，但没有获得水、旱稻，籼、粳稻种群间及不同地域种质的特
异标记带，因而在聚类中，籼、粳亚种也没有明显聚类界线。说明RAPD标记只
能在一定程度上鉴别稻种质或品种，而不能作为籼粳型分化标记。引物S80所
产生的一条约1.0kb、一条约0.8kb的带（新旱2号的特异标记带），S1308产
生一条约2.7kb，是旱稻新品系系列所特有。S80还产生一条约1.5kb的带，
是籼稻所特有（个别非典型的粳稻也具有）。S1319所产生的一条约2.5kb的
带，为香珍矮的特异标记带，没有获得其它种质的特异标记带。
Abstract
The classification position of 32 rices in intersubspecies of rice was initially established. Nine of the above rices were Hsien or Indica, thirteen were partial lndica, four were partial Keng or Japonica and six were Japonica. Agronomic character inspection on some upland rices was made. The regression analysis and line regrssion equation between the yield and 7 quantity characters were carried out.
The preparation method of DNA from the silica-gel-dried leaves of rice and upland rice was studied. The DNA with the length of 45 kb and yield of 50?170 ~t g/g have been acquired, which could be used successfully for conducting PCR. RAPD PCR was run in a reaction volume of 20 t.t L containing 50---- 100 ng template DNA, 1.2 Unit of Taq DNA polymerase, 2.5 mmol/L Mgcl2, 250 ii mol/L dNTPs, 0.5 ii mol/L primer, 10 mmol/L Tris-HC1(pH 8.0), 50 mmol/L KCI and 0.1% gelatin.
42 DNA samples were amplified for random amplified polymorphic DNA analysis with 10 random primers, and 93 polymorphic bands were obtained. The amplified fragments ranged from 0.2 to 3 kb and the genetic distance of them ranges from 0.11 to 0.75. The fingerprints of 42 rices was getted. The result of the finger profile analysis and UPGMA cluster analysis indicated that RAPD only can identify rice species to some extent, but can’t be intersubspecific marker. 42 rices can be differentiated from each other with 560, S80, Si 308 and S 1319. The acquisition of special bands of rice and upland rice, intersubspecific groups and all types of ecological species was failed. Bands of about 1.0 kb, 800 bp and 2.7 kb conducted by S80 and S 1308 were special marker bands of ew-varieties? Bands of some 1.5 kb and 2.5 kb respectively by S80 and Si 319 was special marker bands of lndica and Xiangzhenai? respectively.
引文
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7．杨守仁主编．水稻．北京：农业出版社，1987，P35
8．中国农业科学院主编．中国稻作学．北京：农业出版社，1986，P39～66
9．Nayar，N．M．，Origin and Cytogenetics of Rice．Advance in Genetics Vol.17，1973
10．卢宝荣．稻种遗传资源多样性的开发利用及保护．生物多样性，1998，6(1)：63～72
11．高立志，洪德元．中国稻属研究的主要进展．中国农业科学，1999，32(6)：40～46
12．庞汉化，才宏伟，等。中国普通野生稻的形态分类研究．作物学报，1995，21(1)：18～24
13．许聪，吴万春．海南岛杂草稻的生态考察和鉴定．中国水稻科学，1996，10(4)：247～249
14．丁颖．《中国水稻栽培学》，北京：农业出版社，1961，P181～216
15．钱咏文，刘钧赞，等．我国热带山地稻种类缘的探讨．中国农业科学，1988，21(5)：23～32
16．程侃声，王象坤，等．云南省稻种资源的综合研究与利用，作物品种资源，1988(1)：1～5
17．郑成木，黄东益．海南山栏稻种质类缘与杂交育种利用的研究．热带作物学报，1998，19(2)：74～81
18．朱英国，酶启明，等．水稻品种酯酶同工酶的初步研究．作物学报，1982，8(2)：34～38
19．钱咏文，刘钧赞，等．应用酯酶同工酶研究稻种的亲缘关系．广东农业科学，1981，3：3～5
20．傅春霞，蒋荷，等，利用酯酶同工酶分析水稻品种类型及其演化．江苏农业科学，198l，4：24～28
21．陈瑞阳，宋文芹，等．中国3种野生稻染色体组型的研究．植物学报，1982，24(3)：226～229
22．卢永根，万常沼，等，我为三个野生稻粗线期核型的研究．中国水稻科学，1990，4(3)：97～105
23．郑成木。海南山栏稻遗传基础的研究．热带作物学报，1995；16(2)：110～113
24．吴俊生．水旱稻种质资源香味，颖果性状遗传研究．山东农业科学，1995，2：18～19
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26．杨桂芬，陶大云，等．籼型矮秆陆稻株高遗传研究．西南农业大学学报，1995，17(6)；489～494
27．杨桂芬，陶大云，等，籼型矮秆陆稻株高遗传研究．西南农业大学学报，1995，17(6)；485～500
28．娄希祉，刘学明，等．世界植物遗传资源概况，作物品种资源，1996，(4)：1～6
29．郑殿升．中国粮食作物种质资源农艺性状鉴定、编目和繁种保存概况．作物品种资源，1995，(4)：7～8
30．程建峰，潘晓云，等．陆稻优异种质资源筛选与评价．江西农业学报，1999，11(1)：17～23
31．章一华．植物遗传资源研究的一个新领域———核心样品．作物品种资源，1993，2：1～3
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