中药根除幽门螺杆菌的研究（抑菌实验）
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摘要
目的:通过对临床上长年应用的确有理想疗效的抗幽合剂研究进行优化,并采用均匀设计的方法,开展体外实验,进而筛选出最佳组合,将12味中药优化精简为5味中药,对精简方组方的剂量运用均匀设计的方法进行体外药效学实验,根据实验结果选出药效好的前三种组合。并探讨其作用机理。
材料与方法:
1.材料:微需氧恒温培养箱(中国医科大学第一附属医院中心实验室)、超净化工作台(中国医科大学第一附属医院中心实验室)、高纯氧气,高纯氮气,二氧化碳气体(沈阳鑫东基气体有限公司)、温度湿度表(沈阳市爱尔普仪器有限公司公司)、幽门螺旋杆菌菌株(中国医科大学第一附属医院中心实验室)、脑心浸液琼脂(北京华业寰宇化工有限公司)、和混合抗生素(两性霉素)、万古霉素、磺胺ZSO增菌剂、中药:黄芪、苦参、蒲公英、黄连、生甘草(辽宁中医药大学附属第一医院)。氧化酶试剂盒、尿素酶试剂盒、过氧化氢酶试剂盒(杰美基因微生物试剂有限公司)、羊血清(中国医科大学第一附属医院中心实验室)。
2.方法:培养并保存幽门螺旋杆菌。将由5味中药组成的优化组方用5因素9水平均匀设计表进行设计分组。根据文献及临床经验确定每味药物的剂量范围,制备中药药液,进行药效学实验:杀菌实验、MIC(最小抑菌浓度)实验、纸片法(药敏实验)。培养基PH值对中药复方MIC的影响。将实验结果应用均匀设计软件进行统计分析,得出回归方程,并选出药效好的前三种组合。
结果:
1.抑菌实验:杀菌率较好的分别为9d组:89.5﹪、8c组:85﹪、6c组:82﹪。
2.MIC(最小抑菌浓度)实验:中药组方第6组单独应用,幽门螺旋杆菌的MIC80为:62.5ug/mL;中药组方第8组单独应用;幽门螺旋杆菌的MIC80为:62.5ug/mL中药组方第9组单独应用,幽门螺旋杆菌的MIC_(80)为:31.25ug/mL。结合用显微镜观察其中6、8、9组中药组方抑制细菌生长的效果较好。
3.不同组合药物MIC的测定:中药组方各味中药间有协同或相加作用。组方组成具有合理性,合用可以增强药效。
4.抑菌圈的测定:抑菌圈41mm左右的有:6c、8c、9d、9c组。药效好的前三种中药剂量组合分别为第6组、第8组、第9组。
结论:
通过体外实验筛选抗幽门螺旋杆菌的优势组合:黄芪、蒲公英、苦参、黄连、生甘草及最佳配伍用量:第6组药物剂量依次为:20g、8g、15g、10g、2g;第8组药物剂量依次为:28g、24g、12g、2g、0g;第9组药物剂量依次为:32g、32g、24g、16g、8g对抗幽门螺旋杆菌确有作用。
Purpose:we optimized application by researching the Anti helicobacter pylori mixture of years clinical application which have indeed ideal effect. And using Uniform design method to launch in vitro. and then screened optimal combination. 12 traditional Chinese medicine have been streamlined for 5 traditional Chinese medicine . Using uniform design method to streamline square formula dose and do in vitro pharmacodynamics experiment. According to the result of the experiment elected first three combination. And discuss the mechanism of action.
Material and method:
1. Material: Micro aerobic constant temperature incubator、Super purifying bench、High-purity oxygen、High purity nitrogen、Carbon dioxide gas( Shenyang xin dongji gas Co., LTD )、Temperature humidity table (shenyang love's prachanda instrument Co., LTD.)、H. pylori strains (Beijing CDC) Cerebral heart soaking liquid AGAR (Beijing huaye chemical Co., LTD.), and mixed antibiotic , vancomycin, trimethoprim-sulfamethoxazole thickening agent oxidase ZSO bacteria, urease (jie meigene microbial reagent Co., LTD), sheep serum. Chinese medicine: astragalus, dandelion, sophora flavescens, radix scutellariae, rhizoma coptidis
2. Method :Cultivating and preserve helicobacter pylori. By 5 composed of traditional Chinese medicine with five factors and optimize formula level uniform design table design group. According to literature and clinical experience sure every flavour drug dose, preparation of liquids, TCM muskone experiment: antiseptic experiment, MIC (minimum bacteriostatic concentration) experiments and paper method (antimicrobial susceptibility test). Drug resistance reaction experiment. Medium PH of TCM compound MIC influence. The experimental result by uniform design software of statistical analysis, draw the regression equation, and select pharmacodynamic good first three combinations.
Results:
1. Antibacterial experiment: sterilization rate better respectively :9d groups: 89.5﹪, 8c groups: 85﹪, 6c groups: 82﹪
2. MIC (minimum antibacterial concentrations) experiment: Chinese medicine prescription 6 group used alone, MIC80 helicobacter pylori 62.5ug/mL for:; TCM formula 8 group used alone; Helicobacter pylori for: MIC80 62.5 ug/mL Chinese medicine ninth9 group used alone, MIC80 helicobacter pylori for: 31.25 ug/mL. Combining microscopically of them, 6,8, 9 groups of TCM formula inhibiting bacterial growth effect is good
3.Different combination drugs MIC measuring: TCM formula between the traditional Chinese medicine has synergy or add function. Prescription form a rationality, share can enhance efficacy.
4. The determination of bacteriostatic circle around 41mm bacteriostatic circle, are: 6c, 8c, 9d, the9. Top three kinds of Chinese drug good respectively dose combination of 6, article 8 group, the 9th group.
Conclusion:Through in vitro experiments screening resistance helicobacter pylori advantage combination: astragalus, dandelion, sophora flavescens, rhizoma coptidis, born Kennedy: : and best compatibility dosage: the first six groups is as follows: the dose of drug 8g, 15g, 20g, 10g, 2gb of 8 doses as follows: 24g, 12g, 28g, 2g 0g and 9 group, is as follows: the dose of drug 24g 32g, 32g, 16g, 8g confrontation, h. pylori does work.
材料与方法:
1.材料:微需氧恒温培养箱(中国医科大学第一附属医院中心实验室)、超净化工作台(中国医科大学第一附属医院中心实验室)、高纯氧气,高纯氮气,二氧化碳气体(沈阳鑫东基气体有限公司)、温度湿度表(沈阳市爱尔普仪器有限公司公司)、幽门螺旋杆菌菌株(中国医科大学第一附属医院中心实验室)、脑心浸液琼脂(北京华业寰宇化工有限公司)、和混合抗生素(两性霉素)、万古霉素、磺胺ZSO增菌剂、中药:黄芪、苦参、蒲公英、黄连、生甘草(辽宁中医药大学附属第一医院)。氧化酶试剂盒、尿素酶试剂盒、过氧化氢酶试剂盒(杰美基因微生物试剂有限公司)、羊血清(中国医科大学第一附属医院中心实验室)。
2.方法:培养并保存幽门螺旋杆菌。将由5味中药组成的优化组方用5因素9水平均匀设计表进行设计分组。根据文献及临床经验确定每味药物的剂量范围,制备中药药液,进行药效学实验:杀菌实验、MIC(最小抑菌浓度)实验、纸片法(药敏实验)。培养基PH值对中药复方MIC的影响。将实验结果应用均匀设计软件进行统计分析,得出回归方程,并选出药效好的前三种组合。
结果:
1.抑菌实验:杀菌率较好的分别为9d组:89.5﹪、8c组:85﹪、6c组:82﹪。
2.MIC(最小抑菌浓度)实验:中药组方第6组单独应用,幽门螺旋杆菌的MIC80为:62.5ug/mL;中药组方第8组单独应用;幽门螺旋杆菌的MIC80为:62.5ug/mL中药组方第9组单独应用,幽门螺旋杆菌的MIC_(80)为:31.25ug/mL。结合用显微镜观察其中6、8、9组中药组方抑制细菌生长的效果较好。
3.不同组合药物MIC的测定:中药组方各味中药间有协同或相加作用。组方组成具有合理性,合用可以增强药效。
4.抑菌圈的测定:抑菌圈41mm左右的有:6c、8c、9d、9c组。药效好的前三种中药剂量组合分别为第6组、第8组、第9组。
结论:
通过体外实验筛选抗幽门螺旋杆菌的优势组合:黄芪、蒲公英、苦参、黄连、生甘草及最佳配伍用量:第6组药物剂量依次为:20g、8g、15g、10g、2g;第8组药物剂量依次为:28g、24g、12g、2g、0g;第9组药物剂量依次为:32g、32g、24g、16g、8g对抗幽门螺旋杆菌确有作用。
Purpose:we optimized application by researching the Anti helicobacter pylori mixture of years clinical application which have indeed ideal effect. And using Uniform design method to launch in vitro. and then screened optimal combination. 12 traditional Chinese medicine have been streamlined for 5 traditional Chinese medicine . Using uniform design method to streamline square formula dose and do in vitro pharmacodynamics experiment. According to the result of the experiment elected first three combination. And discuss the mechanism of action.
Material and method:
1. Material: Micro aerobic constant temperature incubator、Super purifying bench、High-purity oxygen、High purity nitrogen、Carbon dioxide gas( Shenyang xin dongji gas Co., LTD )、Temperature humidity table (shenyang love's prachanda instrument Co., LTD.)、H. pylori strains (Beijing CDC) Cerebral heart soaking liquid AGAR (Beijing huaye chemical Co., LTD.), and mixed antibiotic , vancomycin, trimethoprim-sulfamethoxazole thickening agent oxidase ZSO bacteria, urease (jie meigene microbial reagent Co., LTD), sheep serum. Chinese medicine: astragalus, dandelion, sophora flavescens, radix scutellariae, rhizoma coptidis
2. Method :Cultivating and preserve helicobacter pylori. By 5 composed of traditional Chinese medicine with five factors and optimize formula level uniform design table design group. According to literature and clinical experience sure every flavour drug dose, preparation of liquids, TCM muskone experiment: antiseptic experiment, MIC (minimum bacteriostatic concentration) experiments and paper method (antimicrobial susceptibility test). Drug resistance reaction experiment. Medium PH of TCM compound MIC influence. The experimental result by uniform design software of statistical analysis, draw the regression equation, and select pharmacodynamic good first three combinations.
Results:
1. Antibacterial experiment: sterilization rate better respectively :9d groups: 89.5﹪, 8c groups: 85﹪, 6c groups: 82﹪
2. MIC (minimum antibacterial concentrations) experiment: Chinese medicine prescription 6 group used alone, MIC80 helicobacter pylori 62.5ug/mL for:; TCM formula 8 group used alone; Helicobacter pylori for: MIC80 62.5 ug/mL Chinese medicine ninth9 group used alone, MIC80 helicobacter pylori for: 31.25 ug/mL. Combining microscopically of them, 6,8, 9 groups of TCM formula inhibiting bacterial growth effect is good
3.Different combination drugs MIC measuring: TCM formula between the traditional Chinese medicine has synergy or add function. Prescription form a rationality, share can enhance efficacy.
4. The determination of bacteriostatic circle around 41mm bacteriostatic circle, are: 6c, 8c, 9d, the9. Top three kinds of Chinese drug good respectively dose combination of 6, article 8 group, the 9th group.
Conclusion:Through in vitro experiments screening resistance helicobacter pylori advantage combination: astragalus, dandelion, sophora flavescens, rhizoma coptidis, born Kennedy: : and best compatibility dosage: the first six groups is as follows: the dose of drug 8g, 15g, 20g, 10g, 2gb of 8 doses as follows: 24g, 12g, 28g, 2g 0g and 9 group, is as follows: the dose of drug 24g 32g, 32g, 16g, 8g confrontation, h. pylori does work.
引文
[1]姜政黄爱龙陶小红等幽门螺杆菌感染与胃肠外疾病关系的研究[J ]世界华人消化杂志,2002 ,10:706 - 709
[2]杨万刚李学锋.幽门螺杆菌的流行病学研究综述吉首大学学报(自然科学版) 2005,10:第26卷第4期100-102
[3]张万岱姚永莉幽门螺杆菌的研究现状与展望.医学与哲学(临床决策论坛版) 2007,6 :第28卷第6期总第335期8-11
[4]李平楚更五马凤丽张军会杨艳幽门螺旋杆菌的激活培养与保存条件中华中医药学刊2007,9:第25卷第9期1851-1852
[5]陈云华汪春莲谢云幽门螺杆菌致病机制及益生菌防治作用的研究进展世界华人消化杂志2007,9:15(25) 2690-2697
[6]葛挺幽门螺杆菌研究的现状与展望职业与健康2005年5月第21卷第5期668-670
[7]冯一服幽门螺旋杆菌中医治疗研究肠胃病论文2010.8
[8]赵树平溃疡性结肠炎中医药治疗进展[J]临床研究进展2004,21( 6) : 6- 7.
[9]霍红梅郁晓维现代中医药对幽门螺杆菌感染及其相关性疾病的研究近况甘肃中医2008年第21卷第2期
[10]韦艳碧胃幽门螺杆菌感染与中医辨证关系研究[J]广西中医学院学报,2000, 17( 2): 13.
[11]武和平740例胃病辨证分型与幽门螺杆菌的关系[J]上海中医药杂志,1995, 41( 6) : 18- 19.
[12]冯莲君延文幽门螺杆菌与胃脘痛中医分型的关系[J]现代中西医结合杂志, 2000, 9( 2) : 105.
[13]黄玉芬112例脾虚胃病和实证胃病患者胃窦部黏膜病理检测分析[J]南京中医学院学报, 1989, 31( 3) : 3
[14]李雪萍窦逾常中医药抗幽门螺旋杆菌感染研究进展吉林中医药2006,9第26卷第9期74-76
[15]王绪霖缴稳玲吕宗顺抑制幽门螺旋杆菌中药的初步筛选[J]中西医结合杂志,1994,14(9)534-5 36
[16]陈芝芸项柏康朱林喜等100味中药对幽门螺旋杆菌和作用的试验研究[J]时珍国医国药研究,1996 ,7 (1) 25-76
[17]许艺叶柏单兆伟中草药单位与复方对幽门菌抑制及研究[J]中国中西医结合脾胃杂志2000, 8(5):292-293
[18]沈学敏大黄作用机理及应用概述[J]中医文献杂志2000 70( 8) : 31
[19]王煌辉钟景光张永勋大黄抑制幽门螺旋杆菌及其作用机转之研究中医药科研2008.7.7
[20]周增芬崔蓉张永生等大蒜大黄对Hp抑菌作用的实验研究[J]中华实用医学,2002,11(6):1-3.
[21]李娟傅颖媛黄连、太子参影响幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜的变化中国临床康复2006.8.20第10卷第31期78-80
[22]王国中茹新丁丽华等丹参抗大鼠乙酸胃溃疡和防止复发的效果[J]华人消化杂志,1998,6(1):38-39.
[23]危北海,刘晋生,罗小石,等.客观辨证和微观辨证结合研究[J].中医杂志,1991 3(5):30.
[24]张琳杨连文杨李君等.幽门螺旋菌与慢性萎缩性胃炎发病关系及防治研究[J].中国中西医结合杂志,1992,12(9):521-523.
[25]历兰娜孔繁智沈金美半夏泻心汤证与Hp感染关系的临床研究[J].中医杂志,1998,39(4):220-221.
[26]张力超中药治疗幽门螺旋杆菌感染近况〔J〕实用中西药结合杂志1992 4 (5) 237-238
[27]李存柱罗琦自拟抑菌平胃汤治疗幽门姗杆菌感染性胃炎58例安徽中医临床杂志,2001,13(4):239一240.
[28]殷安娜中药治疗幽门娜旋杆菌相关胃病临床观察湖北中医杂志2000,2(5) :14.
[29]林毅王旭清胃除幽汤治疗幽门级旋杆菌阳性消化性演疡45例南京中医药大学学报1997,5(13):305.
[30]王建平湖顺金疏肝理胃汤治疗幽门娜杆菌相关性慢性胃炎44例安徽中医学院学报1998,2(17):13一15
[31]陈玉书陈阳中药治疗幽门螺旋杆菌阳性消化性溃疡分析中医杂志1995,406):222一223.
[32]吴南方自拟愈疡汤怡疗悄化性馈疡幽门螺旋杆苗阳性117例临床观察安徽中医临床杂志2001,13(5):355一356.
[33]陈磐华陆小沽中药复方根除幽门螺旋杆菌感染215例疗效观察上海中医药杂志2001,(9):20一21.
[34]王慧霞加味溃疡散治疗幽门螺旋杆菌阳性消化性溃疡100例甘肃中医2001,(2),11- 12
[35]杨伶俐徐帆李全秀幽门螺旋杆菌所致消化性溃疡治疗研究进展中国医药导报2009,第六卷第七期:7-9
[36]王长洪高文艳林一帆陈山泉陆宇平杨卓巩阳刘杨王立新仁术健胃颗粒治疗气虚血瘀热郁证慢性萎缩性胃炎《中国中西医结合消化杂志》2010年02期
[2]杨万刚李学锋.幽门螺杆菌的流行病学研究综述吉首大学学报(自然科学版) 2005,10:第26卷第4期100-102
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[35]杨伶俐徐帆李全秀幽门螺旋杆菌所致消化性溃疡治疗研究进展中国医药导报2009,第六卷第七期:7-9
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