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MiR-33a对肝癌细胞增殖及迁移的影响
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摘要
miR-33基因定位于固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)16号基因内区,包括miR-33a和miR-33b,分别定位于SREBP2和SREBP1,均具有调节脂质代谢的功能。此外,miR-33a还参与调节糖代谢及许多生理及病理过程,如破骨细胞的分化、性腺的发育,与炎性疾病相关等。miR-33a与肿瘤发生关系密切,在淋巴瘤、黑色素瘤、骨肉瘤、声门癌、宫颈癌等组织中异常表达,其机制可能与β-连环素、pim-3激酶、致癌基因DAM9和酪氨酸蛋白激酶ROS1等有关。此外,miR-33a可通过靶向生物皮肤生长因子smad7、过氧化物酶体增殖激活蛋白α(PPAR-α)等调节调节肝纤维化的发生。尽管如此,miR-33a在肝癌中的研究报道寥寥无几,本研究旨在探究其于肝癌发生发展的关系。目的:探讨miR-33a在肝癌细胞中的表达及其功能。方法:qPCR法检测六种肝癌细胞系及正常肝细胞系LO2中miR-33a的表达量。分别用miR-33a mimic及inhibitor转染SMMC-7721和Huh7 24h、36h、48h,qPCR及Cy3染色法检测miR-33a转染效率,CCK8法检测转染miR-33a对细胞活力的影响,transwell法检测转染miR-33a对SMMC-7721迁移能力的影响。结果:相对于LO2细胞,SMMC-7721、Bel-7405、Hep3B细胞中miR-33a表达量较高,SK-Hep-1、HepG2、Huh7细胞中miR-33a表达量较低,其中SMMC-7721最高,Huh7最低,选择SMMC-7721和Huh7细胞进行下一步研究。两种细胞转染Cy3标记的mimic、inhibitor后各时间点的转染效率均大于90%,qPCR法显示miR-33a mimic转染36h时转染效率最高。CCK8结果表明mimic组SMMC-7721和Huh7细胞活力明显低于对照组,ihibitor组结果相反。Transwell结果表明mimic组SMMC-7721细胞迁移率低于对照组,inhibitor组结果相反。结论:miR-33a在不同的肝癌细胞系中表达不同,SMMC-7721中最高,Huh7中最低。miR-33a抑制SMMC-7721和Huh7细胞增殖,抑制SMMC-7721迁移,表明其参与对肝癌细胞的增殖和迁移的调控,有希望成为一个肝癌诊断及治疗的新靶标。
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