MSC条件培养基对内皮细胞炎性损伤的保护作用
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- 论文作者：陆燕蓉 ; 史梅梅 ; 袁玉佳 ; 刘敬平 ; 陈又南 ; 陈波 ; 李兰 ; 张杰 ; 罗瑞熙 ; 程惊秋
- 年：2016
- 作者机构：四川大学华西医院;
- 论文关键词：间充质干细胞 ; 血管内皮细胞 ; TNF-α ; STC1
- 会议召开时间：2016-11-04
- 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集
- 英文会议录名称：Proceedings of 2016 CSI Congress on Immunology
- 语种：中文
- 分类号：R392
- 学会代码：IGMD
- 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
- 会议地点：中国安徽合肥
- 主办单位：中国免疫学会
- 学会名称：中国免疫学会
- 页数：1
- 文件大小：1225k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
目的 :炎性因子引起的内皮功能障碍在移植排斥、血栓形成、糖尿病的发病中起着至关重要的作用。最近的研究表明,骨髓间充质干细胞(MSC)具有免疫调节、抗凋亡和抗氧化活性,可能在临床治疗中有很好的应用前景。本研究探讨人MSC条件培养基(MSC-CM)对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的干预作用。方法 :MSC在无血清DMEM中培养24 h,收集培养上清经超滤浓缩10倍制备MSC-CM。TNF-α(1ng/ml)处理的HUVEC在含或不含MSC-CM中培养72小时,CCK8检测细胞代谢活性和流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS),q-PCR分析TNF-α暴露24h后炎症因子的基因表达;免疫荧光染色评估NF-κB激活后的核转位;THP-1粘附和成管实验评价内皮功能。q-PCR筛选MSC-CM中的效应因子,并做WB验证;通过添加重组因子斯钙素1(r STC1)及抗STC1抗体封闭MSC-CM中的效应因子,观察其对内皮炎性损伤的影响;通过添加非偶联蛋白UCP2抑制剂验证UCP2在HUVEC表达的MSC-CM保护内皮细胞炎性损伤中的作用。结果 :HUVEC暴露于TNF-α72h后,细胞代谢活性降至对照组的72.4%,MSC-CM处理组恢复至87.6%。TNF-α诱导HUVEC损伤组和MSC-CM干预组ROS活性从1.83倍降到1.36;MSC-CM处理明显抑制TNF-α诱导的内皮细胞VCAM-1、ICAM-1、MCP-1和IL-6基因表达,降低TNF-α诱导的NF-κB活化,NF-κB的核/质比值从0.45降至0.30;此外,MSC-CM处理组HUVEC的THP-1细胞粘附数量减少了52.5%,同时成管能力明显增强:成管的长度(68%vs.47%)、分支点的数量(66%vs.38%)和连接区(78%vs.43%)均有所改善。MSC通过分泌STC1因子,促进HUVEC中UCP2表达,进而抑制内皮中ROS累积,减少NF-κB的活化及炎症因子表达,发挥对内皮细胞炎性损伤的保护作用。结论 :MSC-CM可以通过分泌STC1因子,诱导内皮细胞UCP2表达,保持细胞的活力,抑制细胞内ROS的积累和NF-κB的活化减轻TNF-α诱导的HUVEC功能障碍。提示:MSC-CM可能作为一种无细胞的制剂,在改善内皮细胞的炎性损伤方面发挥潜在的治疗作用。
引文