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制磷脂菌素在枯草芽孢杆菌9407菌株防治苹果轮纹病中的作用
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摘要
枯草芽孢杆菌9407(B9407)是本实验室从苹果上分离获得的有益细菌,在室内和田间条件下对苹果轮纹病菌具有明显的防治效果,而且对苹果等植物的多种病原真菌具有抑菌作用,应用前景广阔。为深入研究该菌株防病及调控机制,本实验室成功构建了B9407 TnYLB-1转座子随机插入突变体库。采用平板颉颃法筛选了14 300株突变子,获得1株抑菌活性完全丧失的突变子,通过反向PCR确定转座子插入位点为制磷脂菌素合成关键基因ppsB上。为了验证制磷脂菌素在B9407菌株防治苹果轮纹病菌中的功能,本研究对制磷脂菌素合成基因操纵子中的ppsB基因进行缺失突变获得△pps。抑菌活性测定结果显示,与B9407菌株相比,△pps的脂肽提取物对苹果轮纹病菌分生孢子完全丧失抑菌活性。薄层层析结合生物自显影结果表明,B9407菌株的脂肽提取物能在Rf=0.1~0.2(以三氯甲烷:甲醇:水=65:25:4作为展开剂)位置处产生一个抑制苹果轮纹病菌的抑菌圈,而△pps的提取物则不能产生抑菌圈。利用高效液相色谱检测发现△pps完全丧失了制磷脂菌素的合成能力。苹果果实上的生防效果测定结果表明,接种病原菌10d后,△pps处理的苹果发病率显著高于B9407菌株的处理。以上结果表明制磷脂菌素在B9407菌株防治苹果轮纹病菌中起重要作用。在B9407菌株中,制磷脂菌素的调控途径尚不清楚,还需要通过分子生物学等手段明确其调控途径。本研究结果为深入研究B9407菌株的防病机制及其调控途径奠定了基础。
引文

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