吲哚胺2,3-双加氧酶影响肿瘤血管形成的实验研究
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摘要
目的:检测吲哚胺2,3-双加氧酶1(Indoleamine2,3-dioxygenase,IDO1)在肺癌组织中的表达水平,探讨肿瘤微环境中IDO1对肺癌血管形成的影响。方法:免疫组织化学法检测41例肺癌石蜡切片的IDO1、CD31、CD34、FactorⅧ的表达情况,并分析IDO1表达水平的高低与微血管密度MVD的关系。转染人肺腺癌上皮A549细胞建立过表达IDO1细胞系,用Western-blot方法检测其转染效率。通过MTT细胞计数法、细胞侵袭实验检测过表达IDO1 A549细胞增值及侵袭能力的变化。利用Transwell小室建立过表达IDO1 A549细胞与HUVEC细胞共培养模型,MTT细胞计数法检测建立共培养模型后HUVEC细胞增殖能力的变化,基质胶成管实验观察HUVEC细胞形成管样结构数量的变化,ELISA及实时荧光定量PCR分别从细胞因子水平及mRNA水平检测HUVEC细胞分泌VEGF量的变化。结果:41例肺癌患者组织中IDO1表达水平与CD34、FactorⅧ标记的MVD呈正相关关系(r=0.333,r=0.342),与CD31标记的MVD无相关性。Western-blot检测A549细胞过表达IDO1的转染效率为41.6%;过表达IDO1 A549细胞的增殖及侵袭能力明显高于空白对照组、阴性对照组。利用Transwell小室建立过表达IDO1 A549细胞与HUVEC细胞共培养模型,发现HUVEC细胞殖速度明显加快,形成管样结构能力明显增加,6h时开始形成管样结构,12h时管样结构最明显且数量最多,24h后管样结构逐渐消失。ELISA、qPCR检测共培养后HUVEC细胞分泌VEGF结果显示过表达IDO1A549细胞与HUVEC细胞共培养组分泌的VEGF含量明显高于其他组。结论:肺癌组织中IDO1表达的水平与CD34、FactorⅧ标记的MVD呈正相关关系,与CD31标记的MVD无关。过表达IDO1A549细胞部分生物学特性发生变化,其增殖与侵袭能力明显增加。过表达IDO1A549细胞与HUVEC细胞共培养模型中HUVEC细胞增殖能力及形成管样结构能力明显增强且mRNA水平、细胞因子水平上分泌VEGF的量明显增多。揭示了IDO1有可能促进肿瘤血管的形成。
引文