狂犬病病毒受体P75NTR原核表达的抗原性分析及多克隆抗体制备
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- 论文作者：钟桃珍 ; 邢杏伟 ; 廖芳 ; 彭可可 ; 邓朝谦 ; 蒋元 ; 欧阳伶宣 ; 覃雨阳 ; 廖素环 ; 梁晶晶 ; 罗廷荣
- 年：2016
- 作者机构：广西大学动物科学技术学院动物传染病实验室;广西大学亚热带农业生物资源保护利用国家重点实验室;
- 论文关键词：狂犬病病毒 ; 神经营养因子受体P75(P75~(NTR)) ; 抗原性 ; 原核表达 ; 多克隆抗体
- 会议召开时间：2016-09-18
- 会议录名称：第六届中国兽药大会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of 2016 the 6th China Congress of Veterinary Medicine
- 语种：中文
- 分类号：S852.4
- 学会代码：ZGXJ
- 会议名称：第六届中国兽药大会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国兽医药品监察所、中国兽药协会
- 学会名称：中国畜牧兽医学会
- 页数：2
- 文件大小：134k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
研究狂犬病病毒(RV)神经营养因子受体P75(P75~(NTR))原核表达的抗原性及制备出多克隆抗体,为进一步研究RV的致病机制奠定基础。本研究采用RT-PCR从感染Flury株的NA细胞中克隆P75NTR基因,选取P75~(NTR)基因的418~681 nt和831~1080 nt的两个区域共513 nt编码171个氨基酸的区域,与pET-32a(+)重组构建原核表达载体,然后转化BL-21(DE3)感受态细胞进行表达,再以纯化的重组蛋白P75~(NTR)免疫昆明小鼠制备本狂犬病病毒受体P75~(NTR)抗体,并以Western blotting和间接免疫荧光技术(IFA)检测其抗原性。结果显示以原核表达载体pET-P75-513转化BL21(DE3)感受态细胞,经0.2 mmol/L IPTG诱导6h可获得较高表达量的P75~(NTR)重组蛋白,且主要以可溶性蛋白形式进行表达,可用Ni-NTA树脂分离柱进行纯化。经Western blotting和IFA检测,发现制备获得的抗P75~(NTR)多抗能与NA细胞表面自然的P75~(NTR)及转染BHK-21细胞表达的P75~(NTR)发生良好反应,且抗体效价高,可达1:16000。
引文