芽孢杆菌EDR2颉颃苹果树腐烂病菌的相关基因及抗菌蛋白研究
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- 论文作者：王娜娜 ; 黄丽丽
- 年：2016
- 作者机构：旱区作物逆境生物学国家重点实验室/西北农林科技大学植物保护学院;
- 论文关键词：突变体库 ; SiteFinding-PCR ; 双向电泳 ; 重组蛋白
- 会议召开时间：2016-08-05
- 会议录名称：中国植物病理学会2016年学术年会论文集
- 英文会议录名称：Proceedings of the Annual Meeting of Chinese Society for Plant Pathology(2016)
- 语种：中文
- 分类号：S436.611.11
- 学会代码：ZGVS
- 会议名称：中国植物病理学会2016年学术年会
- 会议地点：中国江苏南京
- 主办单位：中国植物病理学会
- 学会名称：中国植物病理学会
- 页数：1
- 文件大小：43k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
为了揭示芽孢杆菌EDR2颉颃苹果树腐烂病菌的关键基因及抗菌蛋白,本研究以SP转化方法为基础,分别在细胞壁处理方法、质粒和感受态共同孵育时间、转座诱导温度及转座诱导时间4个方面进行改进,成功建立了颉颃菌株EDR2的转化体系,并利用该体系获得突变体5 256株;以苹果树腐烂病菌强致病力菌株WT03-8为筛选靶标,通过平板对峙法从EDR2突变体库中筛选到21株抑菌活性显著降低的突变体;PCR扩增和Southern杂交结果表明21株突变体全部是转座子TnYLB随机插入EDR2基因组所得,其中,19株突变体是转座子单拷贝插入突变;通过SiteFinding-PCR方法共扩增获得18个转座子插入突变的基因序列,其中,7个基因与颉颃活性相关。同时,利用TCA-丙酮法提取菌株EDR2及其突变体的胞外蛋白,通过双向电泳技术、PQuest 8.0 2D Analysis软件和质谱技术,对部分差异蛋白点进行分析和鉴定;并对其中1个差异蛋白成功进行了外源表达、纯化和颉颃活性测定,得到了一种新的颉颃苹果树腐烂病菌的抗菌蛋白AP-His。
引文