鸡传染性贫血病毒VP1基因在毕赤酵母中的表达和纯化
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- 论文作者：王彦伟 ; 张改平 ; 陈玉梅 ; 孟凤丽 ; 冉云伟 ; 王爱萍
- 年：2016
- 作者机构：zhengzhou univercity;Henan Agricultural University;
- 论文关键词：鸡传染性贫血病毒 ; VP1 ; 毕赤酵母 ; 蛋白纯化
- 会议召开时间：2016-11-04
- 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编
- 英文会议录名称：Abstracts of 2016 CSI Congress on Immunology
- 语种：中文
- 分类号：S852.65
- 学会代码：IGMD
- 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
- 会议地点：中国安徽合肥
- 主办单位：中国免疫学会
- 学会名称：中国免疫学会
- 页数：2
- 文件大小：1335k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
背景:鸡传染性贫血病毒(chicken infectiousanemia virus,CIAV)是环形病毒属的唯一病毒,侵染危害两周龄以下雏鸡,使其发生再生障碍性贫血、全身淋巴组织萎缩、皮下和肌肉出血和胸腺骨髓萎缩等症状,并可导致并发感染和免疫失败,是一种免疫抑制性疾病。CIAV是体积较小的球形二十面体单链环形DNA病毒,包含3种病毒结构蛋白VP1(唯一结构蛋白)、VP2(辅助蛋白)和VP3(与致病及细胞凋亡相关),研究表明CIAV编码蛋白中的病毒结构蛋白VP1对其致病性和免疫原性有重要意义。目的:本研究探索鸡传染性贫血病毒VP1蛋白在毕赤酵母中的高效表达以及纯化,用于新型疫苗的研发。方法及结果:将vp1基因进行密码子优化,人工合成优化后vp1基因,将其克隆至毕赤酵母分泌型表达载体p PIC9K中,构建真核表达质粒p PIC9K-vp1。将p PIC9K-vp1电转化至毕赤酵母GS115菌株,用遗传霉素(geneticin,G418)筛选高拷贝重组子,0.5%甲醇诱导表达。运用SDS-PAGE和Western blotting及Dot-ELISA鉴定表达蛋白。结果表明,重组酵母菌株表达大小约为54 KD的蛋白,并可以与鸡传染性贫血病毒血清发生特异反应。运用凝胶过滤层析,离子交换纤维层析纯化蛋白得到高纯度蛋白。结论:鸡传染性贫血病毒vp1基因通过密码子优化,可以在毕赤酵母表达系统中高效表达及纯化,产生可以与鸡传染性贫血病毒血清特异反应的VP1蛋白,可用于进一步的动物免疫实验,用于新型疫苗的研发。
引文