猪带绦虫胰岛素受体的特征及其对囊尾蚴生长代谢的抑制研究
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- 论文作者：王莉杰 ; 魏艳玲 ; 刘光学 ; 郭爱疆 ; 张少华 ; 侯俊玲 ; 王帅 ; 骆学农
- 年：2016
- 作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室;
- 论文关键词：猪带绦虫 ; 胰岛素受体 ; 免疫组化 ; 受体封闭 ; 免疫保护
- 会议召开时间：2016-08-08
- 会议录名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集
- 英文会议录名称：The Abstracts of the Tenth Symposium for Yong Scientists of China Society of Parasitology
- 语种：中文
- 分类号：S852.734
- 学会代码：JISC
- 会议名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国动物学会寄生虫学专业青年委员会
- 学会名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：601k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
目的开展猪带绦虫胰岛素/胰岛素受体的相关研究,探索猪囊虫病防控的新技术和新手段。方法根据已完成的猪带绦虫基因组序列,以猪带绦虫的cD NA为模板,扩增猪带绦虫的两条胰岛素受体基因(Ts IR-1316和Ts IR-4810),并利用生物信息学软件对其进行系统分析和鉴定。将Ts IR的配体结合区(LBD))构建重组原核表达质粒p ET30a-1316-LBD和p ET30a-4810-LBD,表达、纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting分析。分别以制备的Ts IR-1316-LBD和Ts IR-4810-LBD多克隆抗体进行免疫组化。同时,体外培养豆状囊尾蚴,用外源性人胰岛素、Ts IR-1316-LBD和Ts IR-4810-LBD抗体、受体抑制剂及增效剂等进行处理,检测每组虫体游离的葡萄糖含量、糖原合成以及胰岛素受体的磷酸化水平,据此分析抗体封闭胰岛素受体后,对虫体葡萄糖吸收和糖原合成的影响。分别用纯化的200μg Ts IR-1316-LBD、Ts IR-4810-LBD为抗原,以Quail A为佐剂制备成疫苗,免疫家兔,分析免疫动物的细胞因子和抗体水平以及减虫率,评价Ts IR-1316和Ts IR-4810作为猪囊虫病候选疫苗的可行性。结果扩增获得的Ts IR-1316、Ts IR-4810的ORF分别为5 196 bp和4 920 bp,两者结构高度保守,均具有典型的胰岛素受体特征结构域。在大肠杆菌中成功表达了重组蛋白Ts IR-1316-LBD和Ts IR-4810-LBD,且表达产物能被猪囊尾蚴病阳性血清特异性识别。免疫组化结果表明,Ts IR-1316大量表达于幼虫的体壁及成虫的体壁、卵巢和虫卵中,而Ts IR-4810则仅存在于成虫的实质组织和生殖器官内。体外实验表明,Ts IR-1316-LBD和Ts IR-4810-LBD抗体可有效封闭体外培养的囊尾蚴的胰岛素受体信号通路,从而导致虫体胰岛素受体磷酸化水平、葡萄糖吸收和糖原合成水平降低。家兔免疫实验表明,Ts IR-1316-LBD、Ts IR-4810-LBD蛋白单独免疫家兔均可获得较高的减虫率。结论 Ts IR-1316和Ts IR-4810为猪带绦虫胰岛素受体基因,通过胰岛素受体封闭可以阻断虫体的信号通路。说明研制基于胰岛素受体的重组抗原疫苗是完全可行的。
引文