表达单一肠毒素STa、STb和LT的重组大肠杆菌的构建及毒力比较

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• 论文作者：王磊 ; 周佳 ; 吕阳 ; 张越 ; 李雪妮 ; 吴涛
• 年：2016
• 作者机构：武汉轻工大学动物营养与饲料科学湖北省重点实验室;
• 论文关键词：STa ; STb ; LT ; 大肠杆菌 ; 毒力 ; 乳酸脱氢酶
• 会议召开时间：2016-10-21
• 会议录名称：中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会论文集
• 语种：中文
• 分类号：S852.61
• 学会代码：ZGXJ
• 会议名称：中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十二次动物营养学术研讨会
• 会议地点：中国湖北武汉
• 主办单位：中国畜牧兽医学会动物营养学分会
• 学会名称：中国畜牧兽医学会
• 页数：1
• 文件大小：42k
• 原文格式：O
• 会议级别：全国

摘要

本试验构建了能够稳定表达大肠杆菌单一肠毒素STa、STb和LT的重组大肠杆菌LMG194-pBAD-STa、LMG194-pBAD-STb以及LMG194-pBAD-LT,并对该重组菌进行诱导表达,通过SDS-PAGE凝胶电泳分析,确定表达肠毒素最佳条件为:菌株起始浓度OD_(500)=0.5,添加诱导剂L-阿拉伯糖至终浓度为0.2%,37℃温度下,150 r/min摇床振荡培养20 h,在此条件下,外源蛋白表达量最高。并以本实验室所筛选的强毒株大肠杆菌K88为阳性对照,将三株诱导后的表达单一肠毒素的重组大肠杆菌分别接种到体外培养的猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cell-1,IPEC-1)中,其中以空白的IPEC-1细胞培养液为阴性对照,对所表达的毒素活性进行了检测,试验中IPE-1细胞的数量级为10~5,菌株的接种量为10~7,培养2.5 h后测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,计算三株单一肠毒素菌株与阳性对照组的相对毒性。最终结果表明:LMG194-pBAD-LT和LMG194相对大肠杆菌K88毒性显著较低(P<0.05),LMG194-pBAD-STb相对大肠杆菌K88毒性稍弱但不显著,LMG194-pBAD-STa相对大肠杆菌K88毒性没有差异。由此可见,单一肠毒素重组大肠杆菌构建成功,且三株菌株中LMG194-pBAD-STa毒性较强,可作为后期建立仔猪腹泻模型的候选菌株。

引文