叶酸对鸡原代肝细胞IGF2和脂质代谢相关基因表达的影响
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摘要
在哺乳动物中IGF2与机体的脂肪代谢过程有关,而家禽的脂质代谢主要发生在肝脏中,腹脂沉积也是产业面临的一个严重问题,有研究报道叶酸参与调控家禽脂质代谢,但鲜有报道关于IGF2与家禽脂质代谢之间的关系。本试验旨在研究叶酸对鸡原代肝细胞IGF2和脂质代谢相关基因表达的影响,确定叶酸在鸡原代肝细胞培养中的最适添加剂量,为体外探究叶酸调控家禽脂质代谢机制提供依据。采用改良的酶消化法分离1日龄鸡原代肝细胞,用高碘酸希夫氏染色方法进行肝细胞鉴定;分离得到的肝细胞培养36 h后,以正常培养基(含1 mg/L叶酸)为对照组,处理组培养基分别含0、5、10、15和20 mg/L叶酸,每个处理6个重复,再培养12 h后收集上清液,并提取细胞RNA待测基因的相对表达量。结果表明,采用改良酶消化法可以获得分离效果好且纯度高的鸡肝细胞;不同剂量的叶酸并没有对肝细胞的增殖以及培养液中LDH的活性产生影响(P>0.05);与对照组相比,10、15和20mg/L的叶酸显著降低了肝细胞IGF2以及与脂质合成代谢有关的ACC和FAS基因的表达(P<0.05),但各浓度的叶酸并没有对与脂质分解代谢有关的CP T-1和PPARα基因的表达产生影响(P>0.05);并且鸡肝细胞中ACC和FAS基因的表达与IGF2的mRNA水平存在正相关关系(P<0.05);除此之外,鸡肝细胞IGF2、FAS和ACC的表达与叶酸剂量也存在二次曲线的回归关系(P<0.05)。综上表明,叶酸可通过降低鸡肝细胞中与脂肪酸合成相关基因的表达来调控脂质代谢,并且脂肪酸的合成可能与IGF2具有正相关关系;本试验中叶酸的最适剂量为15 mg/L。
引文