活性污泥高质量RNA快速提取方法研究

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• 出版年：2010
• 作者：金敏；赵祖国；邱志刚；王景峰；陈照立；谌志强；李超；王新为；董彦；李君文
• 单位1：军事医学科学院卫生学环境医学研究所环境卫生与卫生工程研究室
• 出生年：1977
• 学历：博士
• 职称：副研究员
• 语种：中文
• 作者关键词：活性污泥；RNA；菌群；提取；T-RFLP
• 起始页：260
• 总页数：6
• 经费资助：国家自然科学基金项目（30771779）
• 刊名：环境科学
• 是否内版：否
• 刊频：月刊
• 创刊时间：1976
• 主管单位：中国科学院
• 主办单位：中国科学院生态环境研究中心
• 主编：欧阳自远
• 地址：北京市海淀区双清路18号
• 邮编：100085
• 电子信箱：hjkx@rcees.ac.cn
• 网址：http://www.hjkx.ac.cn
• 卷：31
• 期：1
• 期刊索取号：P875.06 929-3

摘要

通过比较RNA产量、纯度、降解程度、特定基因的扩增能力、微生物多样性等评价指标，考察和探讨了5种不同RNA提取方法对活性污泥总RNA提取效果的影响并最终建立了一种快速、有效的活性污泥RNA提取方法，即在TENP和PBS洗涤沉淀污泥的基础上，分别采用溶菌酶和TRIzol裂解活性污泥细菌、氯仿去除细菌裂解液中的蛋白和大部分DNA、异丙醇沉淀核酸和DNaseI水解残留DNA后，最后进一步用离心柱纯化RNA.结果表明，这种方法可以有效提取高质量的菌群RNA，不仅提取的RNA总量多（每g污泥可提取169.6μμgRNA）、纯度高、降解程度低、完整性好、具有丰富的生物多样性，而且可同时进行16SrRNA和amoA基因的RT-PCR扩增反应；与其它方法相比，性价比高，具有明显的优越性，适用于活性污泥RNA的大量提取，同时，T-RFLP结果证明RNA提取方法对分析样品的微生物种类和丰度分析结果影响较大，不同的RNA提取方法所获得的微生物群落基因多样性及其种类、丰度均不同.本研究建立了一种快速、有效的高质量RNA提取方法，将在监测活性污泥菌群动态变化、菌群代谢功能学、微生物群落芯片等研究上具有重要意义.